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共役脂肪酸の微生物生産法の開発とその生化学的解析

共轭脂肪酸微生物生产方法的开发及其生化分析

基本信息

批准号：
02J01985
负责人：
岸野重信
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

【目的】共役リノール酸(CLA)は抗癌作用、抗動脈硬化など多様な生理活性を示すことから近年注目を集めている機能性脂肪酸である。本申請者は、乳酸菌Lactobacillus plantarum AKU 1009aの洗浄菌体が休止菌体反応においてリノール酸を効率よくCLAへと変換することを報告している。本年度では、この乳酸菌を破砕して得られるcell-free extract (CFE)を用いて、リノール酸からのCLA生産に関与する酵素系の解明を試みた。【方法と結果】L.plantarum AKU 1009aの洗浄菌体を超音波破砕処理することによりCFEを得た。本CFEを用いリノール酸からのCLA生産を試み、変換反応が進行することを確認した。さらに、本CFEを超遠心分離することにより得られる上清画分(可溶性画分)および沈殿画分(膜画分)について、CLA生産活性を示す面分の検討を行なった。その結果、可溶性画分および膜画分に分散して存在する少なくとも3つ以上のタンパク質が関与することを明らかにした。その内、一つに関しては遺伝子配列を明らかにし、大腸菌での発現に成功した。本遺伝子産物を発現した形質転換大腸菌のCFEとL.plantarum 1009a CFEの可溶性画分ならびに膜画分との相補試験を行ったところ、本遺伝子産物は、L.plantarum AKU 1009a CFEの膜画分に存在する蛋白質の機能を代替しうることが判明した。また、この酵素系に関与する因子としてモリブデン酸(K_2MoO_4)、NADH、NADPHおよびFADを同定した。

[Objective] CLA has anti-cancer effect, anti-atherosclerosis and multiple physiological activities. The present applicant reports that Lactobacillus plantarum AKU 1009a is a washing bacterium and that it has a stable bacterial reaction. This year, the lactic acid bacteria were tested for cell-free extract (CFE) use, and enzyme systems related to CLA production were identified. [Method and Results] L.plantarum AKU 1009a was treated with ultrasonic wave to obtain CFE. This CFE uses a variety of technologies to produce CLA. In addition, this CFE has been used for ultra-telecentric separation. The supernatant fraction (soluble fraction) and supernatant fraction (membrane fraction) have been obtained. The surface analysis of CLA production activity has been conducted. As a result, soluble and membranous molecules are dispersed in a small amount, and more than 3 molecules are involved in the formation of the molecule. In addition, the detection of E. coli was successful. This gene product was discovered in the soluble fraction of CFE and L.plantarum AKU 1009a CFE, and the function of protein substitution in the membrane fraction of CFE and L.plantarum AKU 1009a CFE was identified. The enzyme system is related to factors such as K_2MoO_4, NADH, NADPH and FAD.