遺伝子改変技術を用いたVEGFR-3の機能解析

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本研究では、内皮細胞におけるProx1の発現を人為的に制御することでProx1の生体における機能を解析することを目的として、2種類のトランスジェニックマウスの作成を進めた。1つは、独自にクローン化したVEGFR-3転写制御領域に、Creリコンビナーゼを接続したトランスジーンである(R3-Cre)。もう一つは、CAG promoter-loxP-GFP(または、βgeo)-pA signal-loxP-Prox1 cDNA-pA signalという構造からなるトランスジーン(CFPまたはCGP)で、Creリコンビナーゼによる切り出しが起きると、それまで発現していたGFP(lacZ)の発現が消失し、下流のProx1 cDNAが発現する。交配により、これら2種のトランスジーンを持つマウスを作成し、内皮でProx1を強発現するマウスを得ることが出来る。R3-CreマウスとROSA26Rマウスとの交配により得られた産仔において、X-gal染色を行ったところ、10系列のうち4系列において、内皮におけるlacZの発現が確認された。作成した3系列のCFPマウスのうち、GFPの蛍光により全身性の発現が期待された1系列を、内皮および心臓でCreを発現するR3-Creマウスと交配した。2種のトランスジーンを持つマウスでは、心臓におけるGFPシグナルの消失およびProx1の発現誘導は確認されたが、内皮におけるProx1の発現誘導は確認出来なかった。GFPの蛍光により全身性の発現が期待されたCFPマウスであるが、内皮細胞におけるトランスジーンの発現が、無い、もしくは十分でないことが予想された。血管およびリンパ管内皮でCGPトランスジーンを強く発現するマウスを作出する必要性がある。