トランスジェニックマウスを用いた遺伝性筋萎縮性側索硬化症の発症機序に関する研究

转基因小鼠研究遗传性肌萎缩侧索硬化症的发病机制

• 批准号: 13670649
• 负责人: 真邊 泰宏
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13670649/
• 关键词: 筋萎縮性側索硬化症; 酸化ストレス; アポトーシス; トランスジェニックマウス; ミトコンドリア

ALS発症者の5〜10%は家族性で、1993年以来第21番染色体長腕上のCu/ZnSOD遺伝子に点突然変異が続々と発見され、ALSの原因としてフリーラジカルの役割が注目されている。フリーラジカルの脊髄神経細胞への影響を検討する目的で、ラット腰髄培養神経細胞において、グルタミン酸、フリーラジカル(NOC18,peroxynitrite)を添加し、TUNELの免疫染色を行いimmunoreactivityを検討した。その結果、前角細胞において24、48時間後にTUNEL陽性細胞数の割合はグルタミン酸添加群、フリーラジカル添加群で有意に増加し(p<0.05)、染色強度も増加した。また、glutamate receptor (AMPA/kainate) antagonist、NO inhibitor、free radical scavengerの効果が認められた。ラット腰髄培養神経細胞死の1つとしてアポトーシスが関与していることが示唆された。そして、グルタミン酸添加、フリーラジカル添加により前角細胞におけるアポトーシスの過程が促進された可能性が示唆された。また、変異SOD遺伝子導入マウスモデルにおいて発症前よりDNAの傷害を示す8-OHdGの増加、生存シグナルであるAktやDNA修復酵素であるredox factor-1の減少を認めることが出来た。発症前よりエネルギー産生の場であるミトコンドリアの機能が低下している事、運動ニューロンの生と死のシグナルがアンバランス(生のシグナルが減少し、死のシグナルが増加)になっている事が明らかになった。このようにALSの病態にはグルタミン酸やフリーラジカルが関与し、運動ニューロン死のメカニズムを分子レベルで徐々に明らかにすることが出来た。

5 - 10% of ALS patients are familial, and the Cu/ZnSOD gene on chromosome 21 has changed suddenly since 1993. The causes of ALS are also noted. Objective: To investigate the effects of cytokinesis on cultured neurocytes. To investigate the immunoactivity of cytokinesis, cytokinesis, cytokinesis (NOC18,peroxynitrite) and TUNEL immunostaining. The number of TUNEL positive cells increased significantly (p<0.05) after 24 and 48 hours in anterior horn cells. , glutamate receptor (AMPA/kainate) antagonist, NO inhibitor, free radical scavenger and their effects are recognized. In the case of cultured neurons, the number of cells in the culture medium is 1. The possibility of promoting this process is demonstrated by the addition of acid and protein to the anterior horn cells. The expression of 8-OHdG, Akt and DNA repair enzyme was detected before the development of the disease. Before the onset of the disease, the field where the disease occurs is reduced, the function of the disease is reduced, the event is moved, the life and death of the disease are reduced, and the event is increased. The disease of ALS is caused by the following factors:

项目成果

Y Manabe, JM Wang, H Warita, Y Shiro, K Abe: "Expression of caspase-3, TUNEL, and Hsp72 immunoreactivities in cultured spinal cord neurons of rat after exposure to glutamate, nitric oxide, or peroxynirite"Neurotoxicity Research. 3. 281-289 (2001)

Y Manabe、JM Wang、H Warita、Y Shiro、K Abe：“暴露于谷氨酸、一氧化氮或过氧化亚硝酸盐后培养的大鼠脊髓神经元中 caspase-3、TUNEL 和 Hsp72 免疫反应性的表达”神经毒性研究。

Y Manabe, JM Wang, H Warita, Y Shiro, K Kashihara, K Abe: "Glutamate enhances DNA fragmentation in cultured spinal motor neurons of rat"Neurological Research. 23. 79-82 (2001)

Y Manabe、JM Wang、H Warita、Y Shiro、K Kashihara、K Abe：“谷氨酸增强大鼠培养脊髓运动神经元中的 DNA 碎片”神经学研究。

Y Manabe, H Warita, T Murakami, M Shiote, T Hayashi, I Nagano, M Shoji, K Abe: "Early decrease of redox factor-1 in spinal motor neurons of presymptomatic transgenic mice with a mutant SOD1 gene"Brain Research. 915. 104-107 (2001)

Y Manabe、H Warita、T Murakami、M Shiote、T Hayashi、I Nagano、M Shoji、K Abe：“具有突变 SOD1 基因的症状前转基因小鼠脊髓运动神经元中氧化还原因子 1 的早期减少”脑研究。

Y Manabe, JM Wang, T Murakami, H Wairita, T Hayashi, M Shoji, K Abe: "Expression of nitrotyrosine and TUNEL immunoreactivities in cultured rat spinal cord neurons after exposure to glutamate, nitric oxide, or peroxynitrite"Journal of Neuroscience Research

Y Manabe、JM Wang、T Murakami、H Wairita、T Hayashi、M Shoji、K Abe：“暴露于谷氨酸、一氧化氮或过氧亚硝酸盐后培养的大鼠脊髓神经元中硝基酪氨酸和 TUNEL 免疫反应性的表达”神经科学研究杂志

K.Abe(Editor): "Molecular mechanism and therapeutics of amyotrophic lateral sclerosis"ELSEVIER. 382 (2001)

K.Abe（主编）：“肌萎缩侧索硬化症的分子机制和治疗”ELSEVIER。