Kombinatorische Selektion von Anticalinen an immobilisierten Peptidkollektiven

固定化肽集合体上anticalins的组合选择

• 批准号: 5321780
• 负责人: Professor Dr. Arne Skerra, Ph.D.
• 金额: --
• 依托单位: Lehrstuhl für Biologische Chemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Units
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2004-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5321780?language=en
• 关键词: Kombinatorische; Selektion; von; Anticalinen; immobilisierten

Anticaline sind eine neuartige Klasse ligandenbindender Proteine mit molekularen Erkennungseigenschaften ähnlich den Antikörpern. Diese künstlichen Proteine wurden durch evolutives Protein Design ausgehend von Lipocalinen gewonnen. In einem kombinatorischen Ansatz wurde das Bilin-Bindungsprotein (BBP) aus P. brassicae erstmals verwendet, um Lipocalinvarianten zu konstruieren, die neue Liganden erkennen. Insgesamt 16 Aminosäuren in den vier Peptidschleifen, die die Bindungstasche bilden, wurden dazu einer gerichteten Zufallsmutagenese unterworfen. Aus der gewonnenen Bibliothek von 3,7x10 8 Mutanten wurden mittels der Phage Display-Technik künstliche Bindungsproteine vor allem für haptenartige Liganden, wie Fluorescein und Digoxigenin, selektiert. Ausgehend von diesen Resultaten soll die Anticalin-Technologie nun eingesetzt werden, um in parallelisierter Weise eine Vielzahl spezifischer Bindungsproteine gegen Peptidsequenzen, die an einem polymeren Trägermaterial ortsgebunden vorgegeben sind, zu erzeugen. Die Target-Peptidsequenzen sollen letztlich von 8000 N-terminalen Hexapeptidsequenzen humaner cytosolischer Proteine abgeleitet werden. Dieses (bzw. zu Testzwecken ein kleineres) Kollektiv soll mit einer geeignet randomisierten Bibliothek der Anticaline inkubiert werden. Nach Gleichgewichtseinstellung sollen die Phagemide von jedem Peptid-Spot eluiert und deren Gensequenz sowie die funktionellen Eigenschaften der kodierten Anticaline analysiert werden. Unter den zu optimierenden Selektionsbedingungen sollte ein Konkurrenzeffekt zwischen den diversen Peptidsequenzen einerseits und den zufällig generierten Bindungsstellen der Anticaline andererseits eintreten, so daß an jedem Spot im Idealfall nur ein oder zumindest wenige Vertreter der Anticalin-Population gebunden werden. Die sonst bei der Phage Display-Methode üblichen repetitiven Anreicherungszyklen könnten sich auf diese Weise erübrigen. Die aus diesem Projekt resultierenden Antipeptid-Anticaline dürften nicht nur als diagnostische Reagenzien im Rahmen der Proteomanalytik oder der medizinischen Gewebetypisierung von Nutzen sein. Darüber hinaus bieten sich vielfältige wissenschaftliche Anwendungen im biochemischen Studium von Proteinen, deren biomolekularen Interaktionen sowie der Zellbiologie an.

Anticaline 是一种新型配体结合剂，与分子分子结合的蛋白质具有抗性。蛋白质技术是通过进化来实现蛋白质设计的。在 einem kombinatorischen Ansatz wurde das Bilin-Bindungs Protein (BBP) aus P. brasicae erstmals verwendet，um Lipocalinvarianten zu konstruieren，die neue Liganden erkennen。 Insgesamt 16 Aminosäuren in den vier Peptidschleifen, die die die die bindungstasche bilden, wurden dazu einer gerichteten Zufallsmutagenese unterworfen. Aus der gewonnenen Bibliothek von 3,7x10 8 Mutanten wurden mittels der Phage Display-Technik künstliche Bindungs Proteine vor allem für haptenartige Liganden，wie 荧光素和地高辛，选择。 Ausgehend von diesen Resultaten soll die Anticalin-Technologie nun eingesetzt werden, um inparallisierter Weise eine Vielzahl spezifischer Bindungs Proteine gegen Peptidsequenzen, die an einempolymeren Trägermaterial ortsgebunden vorgegeben sind, zu erzeugen.目标肽序列由 8000 N 末端六肽序列组成，是人性细胞溶质蛋白质标签。 Dieses (bzw. zu Testzwecken ein kleineres) Kollektiv soll mit einer geeignet randomisierten Bibliothek der Anticaline inkubiert werden。 Nach Gleichgewichtseinstellung sollen 噬菌体 von jedem Peptid-Spot eluiert 和 deren Gensequenz sowie die funktionellen der kodierten Anticaline analysiert werden. Unter den zu optimierenden Selectionsbedingungen sollte e in Konkurrenzeffekt den Differentn Peptidsequenzen einerseits and den zufällig Generierten Bindungsstellen der Anticaline andererseits eintreten, so daß an jedem Spot im Idealfall nur ein oder zumindest wenige Vertreter der Anticalin-人口 韦尔登噬菌体展示方法是一种重复的Anreicherungszyklen könnten sich auf diese erübrigen。该项目结果是抗肽-抗碱剂在蛋白质分析或医学诊断中的诊断试剂。蛋白质生物化学研究所的研究进展，是泽尔生物学和生物分子相互作用的研究。