臨床応用への展開を目指すEGFRを標的とした組換え型ヒト型化diabodyの構築

靶向EGFR的重组人源化双抗体的构建及临床应用

基本信息

批准号：
15760582
负责人：
浅野竜太郎
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15760582/
关键词：
巻き戻し二重特異性抗体 diabody EGFR CD3 ヒト型化 IL-21 抗腫瘍効果

项目摘要

本研究は、当研究室により世界で初めて巻き戻しによる調製に成功した最小の組換え型二重特異性抗体(diabody)の中で、極めて高い抗腫瘍効果を示した上皮増殖因子受容体(EGFR)を標的としたEx3 diabody(Ex3)の医用へのより現実的展開を目的としている。今年度は、1.ヒト型化Ex3の機能改変と評価、2.抗腫瘍エンハンス分子融合Ex3の機能評価、3.Ex3の強力な傷害性に関与する因子、作用機序の解明、の観点から研究を進めた。実績は以下の通りである。(1)前年度作製したヒト型化Ex3を各種機能評価を行った結果、著しい活性の低下が見られた。そこで、機能回復のために直接抗原結合に関与しない残基に変異を導入した10種の変異体を作製したところ、いくつかに活性の回復が見られたため、その中で最もヒト由来配列の多いものをヒト型化Ex3とした。ヒト型化前のEx3とのすべての比較実験において、同等の効果を示し、またマウスを用いたin vivo治療実験でも延命効果が見られたことからもヒト型化Ex3の構築に成功したと言える。(2)昨年度構築した、等研究室で全合成法により構築した抗腫瘍サイトカインIL-21との融合Ex3(IL-21-Ex3)の機能評価を行ったところ、予期しない著しい活性の低下が見られた。この事は、Ex3の末端部位が構造形成、あるいは強力な活性に必要であることを示唆する重要な知見である。(3)蛍光試薬を用いた経時変化観察により、Ex3はアポトーシスを誘導するような働きがあることが分かった。またチロシンキナーゼの阻害能も調べたところ傷害性との相関が見られなかった。即ちチロシンキナーゼの阻害による成長阻害よりもEx3は明らかに早い傷害性を誘導しているという、既存の分子標的治療薬とは異なる作用機序を示唆する結果を得た。

This study aims to develop more realistically into the medical field of Ex3 diabetes (Ex3), targeting the epidermal growth factor receptor (EGFR), which has demonstrated extremely high antitumor effect among the smallest recombinant bispecific antibodies (diabody), which was the world's first ever recombinant bispecific antibodies (diabody), which were successfully prepared by unwinding.今年，我们从1的角度进行了研究。人性化EX3、2。抗肿瘤增强分子融合EX3的功能评估，以及3。阐明涉及EX3有效伤害的因素和作用机理的因素。结果如下：（1）上一年产生的人源化EX3的各种功能评估显示活性显着下降。因此，为了恢复功能恢复，制备了10个突变体，其中突变被引入不直接参与抗原结合的残基中，其中一些表现出活性的恢复，因此最常见的人类衍生的序列称为人源化EX3。在人性化之前，所有与EX3进行的比较实验都显示出相似的作用，使用小鼠的体内治疗实验也显示出生命的效果，可以说这可以成功地构建人源化的EX3。（2）当在去年构建的实验室中进行功能评估，并与抗肿瘤细胞因子IL-21（IL-21-EX3）融合，该实验室由总合成方法构建时，结果显示出意外的活性下降。这是一个重要的发现，即EX3的末端位点是结构形成或有效活性所必需的。（3）使用荧光试剂观察时间依赖性变化表明EX3具有诱导凋亡的功能。此外，当研究了酪氨酸激酶的抑制能力时，未发现与受伤的发现相关性。换句话说，结果表明，EX3诱导的损伤明显比抑制酪氨酸激酶引起的生长抑制更快，这表明作用机理与现有的分子靶向疗法不同。