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臨床応用への展開を目指すEGFRを標的とした組換え型ヒト型化diabodyの構築

靶向EGFR的重组人源化双抗体的构建及临床应用

基本信息

批准号：
15760582
负责人：
浅野竜太郎
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15760582/
关键词：
巻き戻し二重特異性抗体 diabody EGFR CD3 ヒト型化 IL-21 抗腫瘍効果

项目摘要

本研究は、当研究室により世界で初めて巻き戻しによる調製に成功した最小の組換え型二重特異性抗体(diabody)の中で、極めて高い抗腫瘍効果を示した上皮増殖因子受容体(EGFR)を標的としたEx3 diabody(Ex3)の医用へのより現実的展開を目的としている。今年度は、1.ヒト型化Ex3の機能改変と評価、2.抗腫瘍エンハンス分子融合Ex3の機能評価、3.Ex3の強力な傷害性に関与する因子、作用機序の解明、の観点から研究を進めた。実績は以下の通りである。(1)前年度作製したヒト型化Ex3を各種機能評価を行った結果、著しい活性の低下が見られた。そこで、機能回復のために直接抗原結合に関与しない残基に変異を導入した10種の変異体を作製したところ、いくつかに活性の回復が見られたため、その中で最もヒト由来配列の多いものをヒト型化Ex3とした。ヒト型化前のEx3とのすべての比較実験において、同等の効果を示し、またマウスを用いたin vivo治療実験でも延命効果が見られたことからもヒト型化Ex3の構築に成功したと言える。(2)昨年度構築した、等研究室で全合成法により構築した抗腫瘍サイトカインIL-21との融合Ex3(IL-21-Ex3)の機能評価を行ったところ、予期しない著しい活性の低下が見られた。この事は、Ex3の末端部位が構造形成、あるいは強力な活性に必要であることを示唆する重要な知見である。(3)蛍光試薬を用いた経時変化観察により、Ex3はアポトーシスを誘導するような働きがあることが分かった。またチロシンキナーゼの阻害能も調べたところ傷害性との相関が見られなかった。即ちチロシンキナーゼの阻害による成長阻害よりもEx3は明らかに早い傷害性を誘導しているという、既存の分子標的治療薬とは異なる作用機序を示唆する結果を得た。

The aim of this study is to demonstrate the development of EGFR-targeting and Ex3 diabody(Ex3)-based medical applications in the laboratory. This year, the following three aspects are proposed: 1. Functional modification of Ex3 by typing; 2. Functional evaluation of Ex3 by molecular fusion; 3. Explanation of factors and mechanisms of action of Ex3 by potent toxicity; and 4. The following is a summary of the results. (1)The previous year's system was modified to reflect the results of various functional evaluations, and the activity was reduced. In addition, there are 10 kinds of heterogeneic proteins that are involved in direct antigen binding and 10 kinds of heterogeneic proteins that are involved in activity recovery. The results of the experiment were compared with the results of the experiment. (2)The function evaluation of IL-21 fusion Ex3(IL-21-Ex3) was carried out by using total synthesis method. The end of Ex3 is structurally formed, and it is necessary to show the important knowledge. (3)The light test is used to detect the change in the light source. It's not a good idea. It's a good idea. That is to say, the mechanism of action of the existing molecular target is demonstrated by the mechanism of action of the existing molecular target.