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植物遺伝子機能解析のためのハイブリッド型リボザイムの開発

用于植物基因功能分析的杂合核酶的开发

基本信息

批准号：
13750742
负责人：
倉田博之
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyushu Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13750742/
关键词：
BY2 リボザイム形質転換遺伝子機能解析植物細胞 RNA工学

项目摘要

(1)植物体内で高活性を示すハイブリッドリボザイム発現ベクターの開発哺乳類細胞で機能するリボザイムの設計方法をもとにして、植物のtRNA遺伝子、mRNA上をスライディングするタンパクと相互作用するアプタマー配列をハイブリッドさせたリボザイムを作成を行った。tRNAの高次構造を壊さないこと、最適なアプタマーの選択、バルジ構造やステム構造の導入あるいは削除によって安定性、活性の調節を行うことを試みた。(2)植物体内で高活性を示すリボザイムのスクリーニング系開発標的mRNAがどの程度破壊されたのかを測定するための植物培養細胞(タバコBY-2)システムを構築する。BY-2培養細胞は増殖が速く、均一な細胞が得られやすく、多種類のリボザイムの候補をスクリーニングするのに適している。エレクトロポレーションを用いたトランジェントアッセイと、アグロバクテリウムによって安定的に形質転換した細胞を用いたリボザイム活性測定を行う。まず、トランジェントアッセイ行って、デュアルルックシステムを用いて迅速にリボザイムの候補を絞った後、安定的に形質転換したリボザイムを用いて、形質転換体における効果を調べる。BY2への遺伝子導入方法を確立した。(3)形質転換植物体におけるリボザイムの機能解析植物体におけるリボザイムの機能解析を行う。モデル植物であるシロイヌナズナ、タバコに導入した形質転換植物体を作成する。サイレンシングにより表現型が現れる既知の遺伝子を標的にするリボザイムを設計し、生体内におけるリボザイムの発現効率、安定性、活性などを解析することにより植物体内におけるリボザイムの最適化を試みた。リボザイムは標的を効率的に切断しないようであった。その原因については現在解明中である。

(1)A design method for high activity expression in plants and development of mammalian cell functions was developed to create an interaction between tRNA and mRNA in plants. The high-order structure of tRNA can be selected, optimized and introduced into the system, and the stability and activity of tRNA can be reduced. (2)The expression of high activity in plant cells was determined by measuring the level of mRNA expression in plant cells and constructing the expression system in plant culture cells (BY-2). BY-2 culture cells can grow rapidly, uniformly, and in a variety of ways. The activity of the cells was measured in the presence of the enzyme. In addition, the user can quickly select the candidate list after the user selects the candidate list, stabilize the candidate list, and adjust the candidate list after the user selects the candidate list BY2: The introduction method of genetic code is established. (3)Functional analysis of plant body in morphological and morphological changes The plant is introduced into the plant body and the plant body is transformed into the plant body. The expression pattern of the gene is determined by the expression pattern of the gene. The expression pattern of the gene is determined by the expression pattern of the gene. The expression pattern of the gene is determined by the expression pattern of the gene. The expression pattern of the gene is determined by the expression pattern of the gene. A: I don't know. The reason for this is that it is now clear.