食品タンパク質の経口投与により誘導される不応答化T細胞の特性の分子生物学的解析

口服食物蛋白诱导无反应T细胞特征的分子生物学分析

• 批准号: 13760098
• 负责人: 伊勢 渉
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760098/
• 关键词: T細胞; 経口免疫寛容; 遺伝子発現; シグナル伝達; lipid raft; subtraction; トランスジェニックマウス

1)不応答化T細胞に特異的に発現する遺伝子の探索抗原の経口投与により誘導された不応答化T細胞とコントロールT細胞(抗原の非経口投与により誘導されたT細胞)間でsubtractive hybridization法を行うことにより、不応答化T細胞に特異的に発現する遺伝子クローニングした。Differential screeningを行うことにより、擬陽性クローンを排除した。候補クローンについては塩基配列の解析を行った。さらに定量的RT-PCR法を行うことにより、候補クローンの発現特異性について検討し、候補の絞り込みを行った。現在、候補クローンについて全長cDNAのクローニングを行っているところである。2)不応答化T細胞の抗原認識とシグナル伝達不応答化T細胞を抗原/抗原提示細胞で刺激し、raftにおけるシグナル伝達について検討した。すなわちT細胞を非イオン性界面活性剤であるBrij98で可溶化した後、ショ糖密度勾配遠心法によりraft画分を分離した。raft画分に含まれるシグナル伝達分子についてはwestern blotting法により解析した。その結果、コントロールT細胞においては抗原刺激依存的にraftに局在するT細胞レセプター(TCR)、ZAP70、LATなどのシグナル伝達分子の量が増加するのに対し、不応答化T細胞ではこれらシグナル伝達分子の量の増加は認められなかった。さらに共焦点レーザー顕微鏡を用いてTCR、raftマーカーGM1の細胞膜上の局在を調べたところ、コントロールT細胞とは異なり、不応答化T細胞ではTCRやGM1が抗原提示細胞との接触面に局在しているものが少なかった。以上より、不応答化T細胞はraftの局在、raftにおけるシグナル伝達制御に障害があることが示された。

The main results are as follows: 1) the detection of T cells by subtractive hybridization method, the detection of T cells, the detection of T cells. The Differential screening line does not need to be checked, and the gender is not allowed to exclude. Wait for the base column to parse the row. The quantitative RT-PCR method can be used to determine the number of patients, and the number of patients. At present, we are waiting for the long-term cDNA staff to participate in the training program. 2) the T cell antigen

项目成果

T.Yoshida, et al.: "Antigen presentation by peyer's patch cells can induce both Th1-and Th2-type responses depending on antigen dosage, but a different cytokine response pattern from that of spleen cells"Biosci. Biotechnol. Biochem.. 66. 963-969 (2002)

T.Yoshida 等人：“派尔氏结细胞的抗原呈递可以诱导 Th1 型和 Th2 型反应，具体取决于抗原剂量，但细胞因子反应模式与脾细胞不同”Biosci。

M.Hibi, et al.: "Dendritic cells from spleen, mesentric lymph node and Peyer's patch can induce both production of IL-4 and IFN-γ of naive CD4+ T cells in their primary culture, depending on antigen doses"Cytotechnology. (In press).

M.Hibi 等人：“来自脾脏、肠系膜淋巴结和派尔氏集结的树突状细胞可以诱导原代培养物中幼稚 CD4+ T 细胞产生 IL-4 和 IFN-γ，具体取决于抗原剂量”Cytotechnology。在新闻）。

W.Ise, et al.: "Naive CD4^+ T cells exhibit distinct expression patterns of cytokines and cell surface Molecules on their primary responses to varying doses of antigen"J. Immunol.. 168. 3242-3250 (2002)

W.Ise 等人：“幼稚 CD4^T 细胞在对不同剂量抗原的初级反应中表现出细胞因子和细胞表面分子的独特表达模式”J.

T.Yoshida, et al.: "Interleukin 12 and CD86 regulate Th1 and Th2 development induced by a range of antigen doses presented by Peyer's patch and spleen cells"Cytotechnology. (in press).

T.Yoshida 等人：“白细胞介素 12 和 CD86 调节由派尔氏集结和脾细胞呈递的一系列抗原剂量诱导的 Th1 和 Th2 发育”细胞技术。