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肝臓星細胞のビタミンA取り込みの分子機序の解明

阐明肝星状细胞摄取维生素A的分子机制

基本信息

批准号：
13770030
负责人：
佐藤岳哉
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770030/
关键词：
肝臓星細胞ビタミンA RT-PCR Western blot解析遺伝子発現受容体

项目摘要

ビタミンAは細胞の増殖・分化の制御や形態形成、遺伝子の発現制御などに関与する分子である。食物から摂取したビタミンAは消化管から吸収されて肝臓へ輸送される。ビタミンAは肝臓実質細胞に一時的に貯蔵され、レチノール結合蛋白質(以後RBPと記す)との複合体として細胞外に放出され、その近傍の肝臓類洞周囲腔内に存在する肝臓星細胞(以後星細胞と記す)に取り込まれると考えられている。星細胞は、生体内ビタミンAの80%以上をその細胞質内に豊富に存在する脂質滴に貯蔵し、生体の必要性に応じてビタミンAを取り込みまたは放出することにより、ビタミンAの生体内恒常性を調節・維持する重要な細胞である。星細胞のビタミンA取り込みの機序に関しては、星細胞の細胞表面に存在する分子にビタミンA-RBP複合体が結合して細胞の中に取り込まれることが既に報告されているが、ビタミンAの取り込みに関与するこの分子の詳しい解析はまだ行われていない。昨年度の研究で、腎臓近位尿細管でRBPと特異的に結合し,その再吸収を行うメガリンが、星細胞に発現していることをRT-PCRで確認した。(1)昨年度の研究により,星細胞においてメガリンが,発現していることがRT-PCRにより明らかにした。再確認を行うために,実験系の陽性対照として,ラット腎臓より調製した全RNAおよび星細胞のmRNAを用いるRT-PCRを行った。PCRにより増幅される特異的なバンドのサイズおよびその塩基配列は,星細胞において確認されたものと同一であった。(2)メガリンの発現をタンパク質レベルで確認するため,Western blot解析を行った。すなわち,培養肝臓星細胞のタンパク質抽出を行い,5%SDS-ポリアクリルアミドゲルを用いる電気泳動後,PVDF膜に転写,次いで抗メガリン抗体を用いて検出を行った。その結果、肝臓星細胞の抽出液中にメガリンの分子量に相当する330kDのサイズのタンパク質が検出された。以上の結果,メガリンが肝臓星細胞において発現していることをRNAレベルおよびタンパク質のレベルで確認できた。

A. The regulation of cell proliferation, differentiation, morphogenesis, gene development, and molecular processes. Food intake is the most important part of the digestive tract. The protein binding complex (hereinafter referred to as RBP) and the extracellular release of the hepatic stellate cells (hereinafter referred to as astrocytes) in the vicinity of the liver cavity exist in the hepatic stellate cells. More than 80% of astrocytes are abundant in the cytoplasm of the organism, and lipid droplets are stored in the cytoplasm. It is necessary for the organism to select astrocytes and regulate the homeostasis of astrocytes. Astrocyte DNA sequence analysis of molecules present on the surface of astrocyte DNA binding to A-RBP complex in astrocyte DNA sequence analysis of molecules present on astrocyte DNA sequence analysis In the previous year's study, the specific binding of RBP to renal proximal urinary tubules was confirmed by RT-PCR. (1)In the past year's research, astrocytes have been found to be extremely sensitive to RT-PCR. To reconfirm the sequence, we performed RT-PCR on the mRNA of the whole RNA and satellite cells. PCR amplification of specific DNA sequences, astrocytic DNA sequences and DNA sequences (2)The discovery of the menu can be confirmed at the event, and Western blot analysis can be performed. After electroporation with 5% SDS-polyacrylamide,PVDF membrane was prepared, and then anti-polyacrylamide antibody was prepared. As a result, the molecular weight of the protein in the extract of hepatic stellate cells was equivalent to 330kD. The above results confirm the presence of RNA in liver astrocytes.