TRPチャネル蛋白のヘテロ多量体形成によるストア作動性カルシウム流入機構の再構成

通过 TRP 通道蛋白异多聚化重建钙库操纵的钙内流机制

基本信息

批准号：
13770039
负责人：
佐藤栄作
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ストア作動性Ca^<2+>流入(SOC)機構は,血管内皮などの非興奮性細胞において,細胞の生理機能の調節に重要な役割を果たしているが,そのCa^<2+>透過性チャネルの分子本体は未だに明らかになっていない.本課題では,SOCチャネルがTRPCサブファミリーのヘテロ多量体から構成される可能性を想定し,異なるTRPCチャネルの共発現によってSOCが再構成されるか否かを解明することをその目的とした.SOC機構を有しているヒト大動脈内皮細胞にはTRPC4以外にTRPC1,TRPC3及びTRPC6がmRNAレベルで存在していることから,TRPC4とTRPC6を一過性に共発現させたHEK293細胞を用いてSOC機構を細胞内Ca^<2+>濃度測定法によって評価した.この共発現では,受容体刺激やタプシガルギン処置によって引き起こされるストア作動性のCa^<2+>流入およびBa^<2+>流入に有意な影響は観察できなかった.最近,免疫化学的な検討でTRPC4はTRPC1およびTRPC5と蛋白間相互作用を示し,TRPC6はTRPC3と相互作用することが報告されており,細胞内Ca^<2+>濃度測定での結果と一致していた.現在,TRPC4とTRPC1を共発現した細胞を評価中であるがここでもストア作動性Ca^<2+>流入の明らかな増強効果は認められていない.従って,SOCはTRPC4/TRPC6及びTRPC4/TRPC1の組み合わせでは説明できない可能性が示唆されるが,とくに一過性発現細胞では内因性のSOC機構に関連して個々の細胞間での測定値の誤差が大きいという実験系の問題点があり,今後TRPC蛋白を安定的に発現させた細胞を用いた評価によって結論を得たいと考えている.

商店激活的Ca^<2+>涌入（SOC）机制在调节无X型细胞（例如血管内皮）的细胞生理功能方面起着重要作用，但是Ca^<2+>渗透通道的分子体仍然未知。在这个主题中，我们假设SOC通道可以由TRPC亚家族的异栽培者组成，并且我们询问SOC是否通过不同的TRPC通道的共表达来重构。目的是澄清这一点。除了TRPC4，TRPC1，TRPC3和TRPC6外，还存在于具有SOC机制的人主动脉内皮细胞中的mRNA水平。使用细胞内CA^<2+>浓度测量的HEK293细胞评估SOC机制，该细胞瞬时共表达TRPC4和TRPC6。这种共表达涉及使用受体刺激和thapsigargin处理。没有观察到对气管Ca^<2+>和BA^<2+>流入的显着影响。最近，免疫化学研究报告说，TRPC4与TRPC1和TRPC5表现出蛋白质 - 蛋白质相互作用，而TRPC6与TRPC3相互作用，与细胞内CA^<2+>浓度测量结果一致。当前，正在评估共表达TRPC4和TRPC1的细胞，但同样，存储 - erectic ca^在这里。 <2+>涌入没有明显的增强效应。因此，建议您可能不会通过TRPC4/TRPC6和TRPC4/TRPC1的组合来解释SOC，但是实验系统存在一个问题，在这种实验系统中，单个细胞之间测量的错误与细胞内源性SOC机制相关，并且我们希望在未来使用稳定表达的TRP蛋白质的细胞中得出结论。