trp関連蛋白アンチセンスによる血管内皮細胞容量性Ca流入機構の解明

使用 TRP 相关蛋白反义阐明血管内皮细胞中的电容性 Ca 内流机制

• 批准号: 09770053
• 负责人: 佐藤 栄作
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770053/
• 关键词: trp遺伝子; 容量性Ca流入; 血管内皮細胞; アンチセンス; イオンチャネル; 容量性Ca^<2+>流入; Fura-2; パッチクランプ; trp; 細胞内Ca^<2+>濃度

非興奮性細胞に広く認められる容量性Ca^<2+>流入機構をつかさどるチャネル蛋白の本体が、transient receptor potential protein(trp関連蛋白)ではないかとの観点から、本課題では、培養ヒト大動脈内皮細胞で観察される容量性Ca^<2+>流入機構に対するtrp関連蛋白の関与とそのサブタイプを明らかにするためにtrp関連蛋白アンチセンスによる効果を検討する事を目的としてきた。昨年度より分子生物学的手法とその機能解析法の習得のため、ATP感受性カリウムチャネルを再構成させた培養細胞系を用いた電気生理学的な機能解析を行ってきた。 膜2回貫通型内向き整流性カリウムチャネルサブユニットが、細胞内ヌクレオチドによるチャネルの開閉機構とカリウムチャネル開口薬によるその修飾作用に重要な役割を果たしていることを明らかにした。現在、trp関連蛋白アンチセンスの効果は検討中であるが、本年度は、特に分子生物学的手法を用いて、CCEに預かるtrp関連蛋白遺伝子のサブタイプの同定を試みた。具体的には、容量性Ca^<2+>流入機構を示すと報告されてきた4型および5型のtrp関連蛋白のチャネルとしての機能を直接的に解析するために、trp4遺伝子の発現細胞系の作成に着手した。また、ヒト大動脈内皮細胞からcDNAを作成し、trp4およびtrp5遺伝子の縮合プライマーを用いて、その遺伝子の存在の確認および単離を検討中である。 今後は、これらの材料をもとに細胞内Ca^<2+>濃度測定およびパッチクランブ法から、機能解析を行っていく。

从控制传统Ca^<2+>涌入机制的通道蛋白的主体的观点，在非兴奋性细胞中广泛识别的机制是一种潜在的蛋白质（TRP相关蛋白），该受试者旨在研究TRP相关蛋白质反义的效果，以阐明其在TRP蛋白质上的含量<trp ibenty <trp的iper <prote> suber> suber> sube> sube> sube> sube> sube> sube> sube sup sube sup sube>在培养的人主动脉内皮细胞中。自去年以来，为了获取分子生物学方法及其功能分析方法，我们一直在使用已与ATP敏感的钾通道重构的培养细胞系进行电生理功能分析。据透露，两膜内的钾通道亚基在通过细胞内核苷酸及其通过钾通道开放剂的修饰作用的通道的开放和闭合机理中起着重要作用。目前正在研究与TRP相关的蛋白质反义的作用，但是今年，我们试图鉴定CCE中储存的TRP相关蛋白基因的亚型，尤其是使用分子生物学技术。具体而言，为了直接分析与TRP相关的蛋白作为通道的功能4型和类型5，据报道显示出电容性Ca^<2+>涌入机制，我们已经开始创建一个表达TRP4基因的细胞系。此外，正在从人主动脉内皮细胞中制备cDNA，并正在研究使用TRP4和TRP5基因的冷凝引物确认和分离基因的存在。将来，将使用这些材料使用细胞内CA^<2+>浓度测量和PatchClamb方法进行功能分析。

项目成果

Horio Y, Hibino H, Inanobe A, Yamada M, Ishii M, Tada Y, Satoh E, Hata Y, Takai Y, Kurachi Y: "Clustering and enhanced activity of an inwardly rectifying potassium channel, Kir4.1, by an anchoring protein, PSD-95/SAP90" Journal of Biological Chemistry. 16

Horio Y、Hibino H、Inanobe A、Yamada M、Ishii M、Tada Y、Satoh E、Hata Y、Takai Y、Kurachi Y：“通过锚定蛋白聚集和增强内向整流钾通道 Kir4.1 的活性

Eisaku Satoh,Mitsuhiko Yamada,Chikako Kondo,Vez P.Repunte,Yoshiyuki Horio,Toshihiko Iijima,Yoshihisa Kurachi: "Intrancellular nucleotide-mediated gating of SUR/Kir6.0 complex potassium channels expressed in a mammalian cell line and its modification by pi

Eisaku Satoh，Mitsuhiko Yamada，Chikako Kondo，Vez P.Repunte，Yoshiyuki Horio，Toshihiko Iijima，Yoshihisa Kurachi：“哺乳动物细胞系中表达的 SUR/Kir6.0 复合钾通道的细胞内核苷酸介导的门控及其通过 pi 的修饰

Okuyama Y, Yamada M, Kondo C, Satoh E, Isomoto S, Shindo T, Horio Y, Kitakaze M, Hori M, Kurachi Y: "The effects of nucleotides and potassium channel openers on the SUR2A/Kir6.2 complex K^+ channel expressed in a mammalian cell line, HEK293T cells" Pfluge

Okuyama Y、Yamada M、Kondo C、Satoh E、Isomoto S、Shindo T、Horio Y、Kitakaze M、Hori M、Kurachi Y：“核苷酸和钾通道开放剂对 SUR2A/Kir6.2 复合物 K^ 通道的影响

Chikako Kondo,Yez P.Repunte,Eisaku Satoh,Mitsuhiko Yamada, Yoshiyuki Horio,Yuji Matsuzawa,Lutz Pott,Yoshihisa Kurachi: "Chimeras of Kir6.1 and Kir6.2 reveal structural elements involved in spontaneous opening and unitary conductance of the ATP-sensitive K

Chikako Kondo、Yez P.Repunte、Eisaku Satoh、Mitsuhiko Yamada、Yoshiyuki Horio、Yuji Matsuzawa、Lutz Pott、Yoshihisa Kurachi：“Kir6.1 和 Kir6.2 的嵌合体揭示了参与 ATP 自发开放和统一电导的结构元素-