新規遺伝子NUB-1によるNEDD8(ユビキチン様蛋白質)分解機構の解明

阐明新基因 NUB-1 降解 NEDD8（泛素样蛋白）的机制

• 批准号: 13770109
• 负责人: 木藤 克己
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770109/
• 关键词: NEDD8; Ubiquitin; NUB1; Proteasome

我々はyeast two-hybrid screeningによって,NEDD8に結合する70kDaの新規タンパク質を単離することに成功し,NUB1(NEDD8 Ultimate Buster-1)と命名した.NUB1を細胞内で過剰発現させるとNEDD8の減少が観察されたのに対し,Ubや同じUb-like proteinであるSentrin-1(SUMO-1),Sentrin-2に対しては全く影響を及ぼさなかった.我々はNUB1の特異抗体を作製し,ほとんどの臓器で70kDaの単一バンドとして発現していること,細胞内では核に優位に限局していることを明らかにした.さらに,培養細胞にinterforonを作用させるとNUB1発現が亢進することを明らかにした.NUB1によるNEDD8分解活性がproteasomeまたはprotease inhibitorにより抑制されるか否かについて検討したところ,calpain inhibitorであるLLMでは抑制されなかったのに対し,proteasome inhibitorの作用をもつLLnL,MG-132,さらにproteasome特異的inhibitorであるclasta-lactacystin β-lactoneでNUB1の活性が抑制された.NUB1は26Sproteasome分画には存在するものの,20S分画には存在しないことから,調節ユニットであるPA700と結合していることが示唆され,実際にPA700の構成分子のひとつであるS5aと結合することを明らかにした.また,我々はubiquitinと交差反応を示さないNEDD8特異抗体を作製し,免疫組織化学的に臓器での発現を詳細に報告し,NEDD8がubiquitin陽性を示す病的封入体においても蓄積していることを明らかにした.

In the past two hybrid screening experiments,NEDD8 combined with the 70kDa protein Sentrin-1 (SUMO-1), Sentrin-2 and NUB1 (NEDD8 Ultimate Buster-1) were successfully named. NUB1 was detected in the intracellular pathway of NEDD8, and Ub and Ub-like protein Sentrin-1(SUMO-1) and Sentrin-2 were detected. We have a specific antibody against NUB1, and the 70kDa protein is detected in the cell. In addition, NUB1 was found to increase the activity of NEDD8 in cultured cells due to protease inhibitor inhibition,calpain inhibitor, LLM inhibition, and proteasome inhibitor activity. LLnL, MG-132, LLnL, LLnL, MG-132, LLnL, MG-132, LLnL, LLn The activity of NUB1 was inhibited by clasta-lactacystin β-lactone, a proteasome specific inhibitor. NUB1 26Sproteasome was found to regulate PA700 binding. In fact, PA700 is composed of S5a molecules. We report in detail the discovery of antibodies specific to NEDD8 by immunohistochemistry and the accumulation of antibodies specific to NEDD8 in the ubiquitin positive envelope.

项目成果

A.Miyoshi, K.Kito, et al.: "Indentification of CGI-121, a novel PRPK(p53-related protein kinase)-binding protein"Biochemical and Biophysical Research Communications. (in press). (2003)

A.Miyoshi、K.Kito 等人：“CGI-121 的鉴定，一种新型 PRPK（p53 相关蛋白激酶）结合蛋白”生物化学和生物物理研究通讯。

K.D.Afroz, K.Kito, et al.: "NEDD8 protein is involved in the ubiquitinated in ubiquitinated inclusion bodies"Journal of Pathology. 199. 259-266 (2003)

K.D.Afroz、K.Kito 等人：“NEDD8 蛋白参与泛素化包涵体的泛素化”病理学杂志。

Y.Abe, S.Matsumoto, S.Wei, K.Nezu, A.Miyoshi, K.Kito, et al.: "Cloning and characterization of a p53-related protein kinase expressed interleukin-2 activated cytotoxic T-cells, epithelial tumor cell lines, and the testis"Journal of Biological Chemistry. 2

Y.Abe、S.Matsumoto、S.Wei、K.Nezu、A.Miyoshi、K.Kito 等人：“表达白细胞介素 2 激活的细胞毒性 T 细胞、上皮细胞的 p53 相关蛋白激酶的克隆和表征

S.Wei, K.Kito, et al.: "Incidence of p53 and ras gene mutations in DMBA-induced rat leukemias"Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 21(3). 389-396 (2002)

S.Wei、K.Kito 等人：“DMBA 诱导的大鼠白血病中 p53 和 ras 基因突变的发生率”实验与临床癌症研究杂志。

T.Kamitani, K.Kito, et al.: "Targeting of NEDD8 and its cojugates for proteasomal degradation by NUB1"Journal of Biological Chemistry. 276. 46655-46660 (2002)

T.Kamitani、K.Kito 等人：“NUB1 靶向 NEDD8 及其共轭物进行蛋白酶体降解”《生物化学杂志》。