低濃度LPSに反応するB-1細胞のCD14を介したシグナル伝達経路の解析

B-1细胞响应低浓度LPS时CD14介导的信号转导通路分析

• 批准号: 13770138
• 负责人: 杉山 剛志
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770138/
• 关键词: Lipopolysaccharides; B-1 cell; Toll-like receptors; Interferon-γ; Signal transduction; Mitogen-activated protein kinase; Morphological change; Macrophage

B-1細胞はいわゆる普通のB(B-2)細胞とは異なり、一般にT細胞非依存性に低親和性のIgMを産生し、自然免疫に関わるといわれている。TH2.52はLPSに反応してIgMや種々のサイトカインを産生するB細胞株であるが、我々はこの細胞株がB-1細胞の特徴を持つこと、さらに、CD14を発現しており、CD14依存的に低濃度LPSに反応しNF-κBの活性化、細胞増殖を起こすことを報告している。本研究ではこのTH2.52のLPS刺激応答におけるシグナル伝達とToll様受容体の発現、MAPKの活性化との関連について検討を行った。TH2.52のmRNAを抽出し、RT-PCRによりRP105、TLR4及びMD-1とMD-2の発現を調べたところ、これらすべての発現が確認された。ERK1/2はLPS濃度依存的にリン酸化され、さらに抗CD14抗体で細胞を処理した後LPSを加えるとERKのリン酸化は抑制された。SAPK/JNKについても同様の結果が得られた。以上の結果よりTH2.52においてLPSは膜型CD14依存的にMAPKを活性化することが明らかになった。さらに、我々はこのTH2.52がIFN-γ刺激によりマクロファージ様に形態変化を起こすことを見出し、その機構について解析を行った。IFN-γ刺激によりTH2.52は貪食能を持ち、Esterase陽性を示した。IFN-γを除去すると元来のTH2.52の形態へと戻った。インヒビター及びドミナントネガティブコンストラクトを用いた実験より、このマクロファージ化はp38MAPK依存的におこり、さらにIL-4がIFN-γ刺激によるp38のリン酸化を抑制することにより形態変化を抑制することが明らかとなった。これらの結果からTH1サイトカイン、TH2サイトカインによりB-1細胞株TH2.52の機能が制御されていることが示唆された。

B-1 cells are different from ordinary B (B-2) cells, T cell independent, low affinity IgM production, and natural immunity. TH2.52 is a B cell line that produces LPS-dependent IgM and IgM-dependent cytokines. The characteristics of B-1 cells in TH2.52-dependent B cell line are described in this paper. CD14-dependent LPS at low concentrations induces NF-κ B activation and proliferation. This study investigated the relationship between the activation of MAPK and the development of Toll receptor in response to LPS stimulation of TH2.52. The mRNA expression of TH2.52 was detected by RT-PCR and confirmed by the expression of RP105, TLR4 and MD-1 and MD-2. ERK 1/2 was inhibited by LPS concentration-dependent acidification and anti-CD14 antibody treatment. SAPK/JNK is the same result. As a result, TH2.52 was activated by LPS and CD14-dependent MAPK. In addition, we have identified TH2.52 as the most important factor in IFN-γ stimulation. IFN-γ stimulated TH2.52, which was positive for gluttony and Esterase. IFN-γ was removed from the original TH2.52 and the morphological changes were observed. The p38 MAPK-dependent protein is inhibited by IL-4 and IFN-γ stimulation, and the morphological change is inhibited by IL-4 and IFN-γ stimulation. The results showed that TH1 and TH2 cell lines could inhibit the function of B-1 cell line TH2.52

项目成果

Koide N, Sugiyama T, Kato Y, et al.: "Mouse B1 cell line responds to lipopolysaccharide via membrane-bound CD14"J Endotoxin Res. 7・1. 39-43 (2001)

Koide N、Sugiyama T、Kato Y 等：“小鼠 B1 细胞系通过膜结合 CD14 响应脂多糖”J Endotoxin Res 7·1 (2001)。

Sugiyama T, Koide N, Chakravortty D, et al.: "The expression of membrane-bound CD14 renders mouse B-1 cells susceptible to LPS"J Endotoxin Res. 7・3. 223-226 (2001)

Sugiyama T、Koide N、Chakravortty D 等：“膜结合 CD14 的表达使小鼠 B-1 细胞对 LPS 敏感”J Endotoxin Res 7·3 (2001)。

Koide N, Sugiyama T, Mori I, et al.: "Change of mouse CD5(+) B1 cells to a macrophage-like morphology induced by gamma interferon and inhibited by interleukin-4"Clin Diagn Lab Immunol.. 9・6. 1169-1174 (2002)

Koide N、Sugiyama T、Mori I 等人：“小鼠 CD5(+) B1 细胞向巨噬细胞样形态的变化，由 γ 干扰素诱导并受白细胞介素 4 抑制”Clin Diagn Lab Immunol.. 9・6。 1169-1174 (2002)