コッホの原則を満たす実験的マウス潰瘍性大腸炎起炎菌の同定

满足科赫原理的实验性小鼠溃疡性结肠炎致病细菌的鉴定

基本信息

批准号：
21659110
负责人：
杉山剛志
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Gifu Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659110/
关键词：
感染免疫

项目摘要

潰瘍性大腸炎(Ulcerative colitis、以下UC)は、病因が不明の慢性炎症を特徴とする腸疾患である。病因として腸内細菌叢の関与が古くから疑われているが、関与する菌種、発症機構については未だ明らかではない。我々はヒトUCと酷似した病態を示すデキストラン硫酸ナトリウム(Dextran Sulfate Sodium : DSS)誘発マウスUCモデルにおいて、抗菌薬投与により発症が抑制され、さらにこのマウスに対し正常マウス糞便により腸内細菌叢を再構築することで再び発症するという実験系を確立した。本研究ではこれらのマウスの腸内細菌叢をT-RFLP解析に加えて定量PCR法を用い、T-RFLP解析では検出できない非主要細菌叢の変化を解析した。抗菌薬投与により糞便中のAtopobium群、Bacteroides群、Bfidobacterium群、Lactobacilus群が顕著に減少することが明らかになった。それに対し、主要な菌群であるClostridium coccoides群はほとんど変化せず、相対的にC. coccoides群は抗菌薬投与後に80%以上を占める最優位菌群となることがわかった。しかし、再発症する腸内細菌叢再構築マウスでは抗菌薬投与マウスに比べて明らかな菌叢の変化はみられなかった。従って、本モデルで再発症に関与する菌叢の変化は糞便中には検出されないと考えられた。そこで、結腸粘膜に存在する細菌叢について同様に比較したところ、Clostridium属細菌の変化が顕著であり、抗菌薬投与により減少し、再構築マウスで再び増加していることがわかった。さらに、T-RFLP解析により同菌に相当するフラグメントを同定した。この結果をもとに本菌を再構築に用いた菌液中の細菌から単離し、同菌による腸内細菌叢の再構築を行うことによりUC起炎菌として必要十分であるかを検討する必要がある。

溃疡性结肠炎（UC）是一种肠道疾病，其特征是病因未知的慢性炎症。长期以来，肠道菌群的参与一直被认为是一种发病机理，但疾病发作的物种和机制仍然未知。 We have established an experimental system in which antibiotics suppress the onset of a mouse UC model inducing dextran sulfate (DSS) that exhibits a pathology that is very similar to that of human UC, and that the onset of this mouse is suppressed by administration of antibiotics, and the onset of this mouse is reconstructed by normal mouse feces, causing the onset of this mouse to reconstruct the intestinal flora.在这项研究中，除了T-RFLP分析外，还使用了这些小鼠的肠菌群，并使用定量PCR方法来分析t-RFLP分析无法检测到的非毛孔菌群的变化。已经表明，抗生素给药可显着降低粪便植物群，杆菌组，Bfidobacterium群和乳酸杆菌组。相比之下，几乎没有改变coccoides梭菌基团，主要细菌基团，发现是最优势群的C. coccoides组，占抗生素给药后80％以上的细菌。但是，与抗生素处理的小鼠相比，复发性肠道微生物菌群的菌群没有明显变化。因此，人们认为在粪便中未检测到该模型中涉及复发的菌群的变化。因此，对结肠粘膜中存在的细菌菌群进行了类似的比较，发现梭状芽胞杆菌属的变化是明显的，并通过抗生素给药而减少，并在重构小鼠中再次增加。此外，通过T-RFLP分析鉴定出与相同细菌相对应的片段。基于这些结果，有必要考虑通过在用于重建细菌溶液中的细菌中分离细菌的细菌是否是必要的，并且足以使UC诱导的燃料细菌足以重建并通过同一细菌重建肠道菌群。