肝癌細胞増殖抑制へのWeel分子の役割の解明と肝癌の遺伝子治療への応用

阐明Weel分子抑制肝癌细胞生长的作用及其在肝癌基因治疗中的应用

• 批准号: 13770289
• 负责人: 橋本 修
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770289/
• 关键词: Weel; 遺伝子治療; Hep3B

本年度の研究目的は、Weelの制御(Adenovirus-Wee1)をもちい癌に対する効果をみることであった。しかしながら、Pfzer社がWee1のinhibitorを開発した。そこで、今年度はこの試薬でTGFβ1により誘導されたWeelによるG2/M arrestを解除できるのをまず検討することにした。高分化肝癌の特徴を持つHep3BにTGFβ1を添加後、12,24,36,48hの細胞周期の変化をflow cytometerにて観察した。Cdc2,Weel,Cdc25C, Cdc2-Ty15のリン酸化をWestern blot法にて、Wee1,Cdc25CのmRNAの発現量をRT-PCRで検討した。さらに、WeelのInhibitorをTGFβ1を添加後、24hに2.5nMの濃度で6h処理した。処理、無処理群のCdc2,Cdc2-Ty15をWestern blot法で48h後の細胞周期の変化もflow cytometerで観察した。TGFβ1処理24時間後にG2/M arrestを起こした。この時点でCdc2の蛋白発現量に変化はなかったが、その活性は完全に消失していた。Cdc2-Ty15のリン酸化は12時間で増強した。WeelのmRNAの発現は一定であったが、蛋白は12時間をピークに増強していた。TGFβ1を添加後24hのHep3BをWeel Inhibitorで処理をするとCdc2は変化がなかったが、Cdc2-Ty15は著明に減少した。G2/M期にarrestしていた細胞はG1期に移動した、48h後にはこれらの細胞はapoptosisに陥った。Weel Inhibitorは肝細胞癌のTGFβ1による抵抗性獲得の機構を破壊し、apoptosisへ誘導できうる可能性があり、肝癌への治療への応用も期待された。

This year's study aims to control the effects of Adenovirus-Wee1. Pfzer Wee1's inhibitor is open. This year's test results show that TGFβ1 is induced by G2/M arrest and released by G2/M arrest The characteristics of well-differentiated hepatocellular carcinoma were observed by flow cytometer at 12,24,36, and 48h after Hep3B was added. Western blot analysis of Cdc2,Weel, Cdc25C, Cdc2-Ty15 and RT-PCR analysis of Weel, Cdc25C mRNA expression were performed. In addition, Weel Inhibitor TGFβ1 was added at a concentration of 2.5 nM for 24h and treated for 6h. Cell cycle changes of Cdc2, Cdc2-Ty15 in treated and untreated groups were observed by Western blot at 48h after treatment. G2/M arrest began 24 hours after TGFβ1 treatment. At this time, the protein production of Cdc2 changed and the activity of Cdc2 disappeared completely. Cdc2-Ty15 and 12 hours of acidification increased. The expression of Weel mRNA was determined, and the protein was increased at 12 hours. 24h after TGFβ1 was added, Hep3B was treated with Cdc2 and Cdc2-Ty15. G2/M phase arrest, cell migration, 48h later cell apoptosis Weel Inhibitor is expected to be used in the treatment of hepatocellular carcinoma due to its ability to induce TGFβ1 resistance.