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創傷治癒と肥満細胞:ヒトキマーゼの血管内皮細胞や線維芽細胞に及ぼす影響

伤口愈合和肥大细胞：人糜酶对血管内皮细胞和成纤维细胞的影响

基本信息

批准号：
13770453
负责人：
森上徹也
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kagawa Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770453/
关键词：
創傷治癒キマーゼ血管内皮細胞血管新生肥満細胞

项目摘要

キマーゼとトリプターゼ添加における血管新生方法 24ウエル上で、ヒト血管内皮細胞と繊維芽細胞を共培養させたもので、管腔形成に関する観察を行った。クラボウより血管新生キット(KZ-1000)を購入し、キット到着日,その3日後、6日後、8日後の計4回の試薬の添加と血管新生キット専用培地の交換を行った。試薬添加後11日目に一次抗体としてMouse anti human CD31抗体で染色し、二次抗体にGoat anti mouse IgG AlkP Conjugateで反応させ、BCIPで発色、視覚化した。1ウエル内を十時にマークして、4ヶ所を顕微鏡10倍で撮影し、NIHimageにより管腔形成量を管腔面責として求め、スコアリングした。スコアリングは4ヶ所の管腔面積を平均したものである。Positive controlとしてVEGF-A、Negative controlとしてsuramin、ControlとしてMediumを用いた。キマーゼ濃度は0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/mlで、さらに阻害剤10μgを加えたものと比較した。また、トリプターゼ0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml添加したものでも検討を行った。結果キマーゼ添加に関しては血管新生キットのロット差があるのか、スコアリングに傾向を認めることが困難だった。トリプターゼ添加に関しては、抗体中にアジ化ナトリウムが入っていたため、濃度依存的にスコアリングが下がっている。この結果については現在検討中である。

Methods of angiogenesis in vitro and in vivo After 3 days, 6 days and 8 days of purchase, 4 times of trial addition and exchange of angiogenetic space (KZ-1000) were planned. 11 days after the addition of the primary antibody, Mouse anti human CD31 antibody, Goat anti mouse IgG AlkP Conjugate, BCIP staining, and visualization 1. Microscope 10 times, NIHimage 10 times, lumen 10 times The average lumen area of the 4-inch tube Positive control, Negative control, suramin, Control, Medium The concentration of the drug was 0.1ng/ml, 10ng/ml, and 10μg. Add 0.1ng/ml, 1ng/ml and 10ng/ml to the list. It is difficult to increase the number of new blood vessels. For example, if the antibody is added to the medium, the concentration dependent medium will be added to it. The result of this is that we are now in the middle of the discussion.