遺伝子改変マウスを用いたエリスロポエチン受容体の機能解析と多血症病態モデルの作製

转基因小鼠促红细胞生成素受体的功能分析及红细胞增多症病理模型的建立

• 批准号: 13770570
• 负责人: 向井 陽美
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770570/
• 关键词: エリスロポエチン受容体; GATA-1

EPOR変異体によるEPORノックアウト(KO)マウスのレスキュー:血球特異的に発現する遺伝子制御領域(GATA-1HRD)に、EPOR細胞内ドメイン変異体(SHP1結合部位欠損、SHP2結合部位欠損)cDNAを結合させたトランスジーン(Tg)を持つTgマウスを作製した。上記TgマウスとEPORヘテロマウスの交配により、EPORヘテロ体かつTgを有するマウス(EPOR+/-::Tg(+))を得、EPOR+/-との交配により、内因性のEPORを保有せず、外来性のEPOR変異体遺伝子のみを有するレスキューマウス(EPOR-/-::Tg(+))の作製を試みた。この手法で、全長型cDNAのTgではEPOR KOマウスのレスキューが可能であるが、SHP1結合部位、SHP2結合部位欠損Tgではレスキューできず、貧血により胎生致死となることがわかった。GATA-1HRD制御下でのEpoR発現には、EpoRのC末端領域が必要であると考えられ、PI-3kinaseによるアポトーシス抑制の重要性が示唆された。貧血、血小板増多を示すマウスの原因の特定:SHP1結合部位欠損マウス3ラインのうち1ラインで、Hb5-8g/dlの貧血、および150-240万/μlの血小板数増多を呈するマウスが出現した。このような表現型はTgを2つのアレルに持つマウスのみに認められ、またTgの発現量に関係ないことからTgが挿入された部位特異的な変化であると考えた。マウス骨髄細胞、胎児肝細胞で行った解析から、c-kit、Sca-1ダブルポジティブ細胞の増加、巨核球-血小板系の増加、および赤芽球の減少が認められた。巨核球系、赤血球系の共通の造血幹細胞から赤血球系への分化が進まず、巨核球へ分化が進んでしまうものと予想される。Tg断端部位の検索により、Tgはマウス10番染色体上、c-Mybの約80kbp上流に挿入されていることが判明した。Tg挿入により影響を受けた遺伝子の特定をBACおよびESTを用いて進めている。BACRP-24 63G10を用いたノザンブロットでTgマウスではmRNAの発現が低下していることが判明した。このBACを用いて新たな造血調節因子の同定を進めると同時に、BAC Tgマウスを作製し、レスキューを試みているところである。

EPOR variant (KO): Hemocyte specific gene expression domain (GATA-1HRD), EPOR intracellular variant (SHP1 binding site deficient, SHP2 binding site deficient)cDNA binding domain (Tg), Tg binding domain. The above mentioned Tg, EPOR, EPOR and Tg (EPOR+/-:Tg(+)), EPOR+/-and Tg (EPOR+/-:Tg(+)), endogenous EPOR and exogenous EPOR are tested. The Tg of the full-length cDNA was determined by PCR. The Tg of the full-length cDNA was determined by PCR. The Tg of the full-length cDNA was determined by PCR. The discovery of EpoR under GATA-1HRD regulation is necessary, and the importance of PI-3kinase inhibition is demonstrated. Specific causes of anemia and increased platelet count:SHP1 binding site deficiency, Hb5-8g/dl anemia, and increased platelet count of 1.5 - 2.4 million/μl. The phenotype Tg 2 is the same as the occurrence of Tg 2. Increase in bone marrow cells, fetal liver cells, c-kit, Sca-1 cells, increase in megakaryos-platelet lineage, decrease in erythrocytes Hematopoietic stem cells common to megakaryocyte lineage and erythroid lineage, erythroid lineage differentiation and megakaryocyte differentiation The Tg fragment was identified on chromosome 10 and upstream of c-Myb at about 80kbp. Tg is the most important factor influencing the development of BAC and EST. BACRP-24 63G10 is used to detect low levels of mRNA expression. BAC uses new hematopoietic regulatory factors to regulate blood flow.

项目成果

Suzuki N, Ohneda O, Mukai HY et al.: "Erythroid-specific expression of the erythropoietin receptor rescued its null mutant mice from lethality"Blood. 100(7). 2279 (2002)

Suzuki N、Ohneda O、Mukai HY 等人：“促红细胞生成素受体的红细胞特异性表达使其无效突变小鼠免于致死”Blood。