ミスマッチ修復遺伝子の転写制御機構の検討:転写因子の単離同定と役割の解明

错配修复基因转录控制机制的研究：转录因子的分离和鉴定及其作用的阐明

基本信息

批准号：
13770720
负责人：
有田通恒
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

DNAミスマッチ修復(MMR)遺伝子の異常は散発性大腸癌などの消化器癌や卵巣癌など多くの癌で報告されている.代表的なMMR遺伝子hMLH1の散発性大腸癌におけるタンパク発現異常の機構について調べたところ,異常を引き起こす既知の概念では説明不可能な結果を得た.そこで転写制御の詳細を知る必要があった。本研究では,hMLH1遺伝子の転写制御機構について(1)転写必須領域の特定,(2)転写因子の同定の2段階で調べる計画を立てた.本年度は,すでに特定化したhMLH1遺伝子転写調節に重要な3カ所のタンパク結合部位(FP3,FP61,CCAAT-box)に結合するタンパクについて研究を行った.まず,これら結合部位をbait配列とし酵母(S.cerevisiae) one-hybrid法を用いてヒト胎盤由来cDNAライブラリーから結合タンパクを検索したところ,FP3結合タンパクの候補として40クローンが得られた.これらクローンのうち塩基配列が決定できた18クローンについてBLAST検索を行ったところ,p29 GCIP-interacting proteinの遺伝子が4クローン見出された.これら4クローンのORFはすべて一致しており,かつfull lengthのcDNA(753bp)を含んでいた.他のクローンではフレームが一致しておらず,またORFも70bp以下と短かったことから,これらクローンは結合タンパクをコードしていない可能性が大であった.このことから,p29のみがFP3結合タンパクの有力な候補と考えられた.p29遺伝子は散発性大腸癌を含む多くの癌で欠失が見られる1p31-32領域に位置することからも発癌との関連に興味が持たれた.今後,分子生物学的な機能解析ならびにp29に異常の認められる臨床検体の検索などによる発癌への関与の解明が期待される.また,FP61ならびにCCAAT-box結合タンパクについても今後の研究課題となった.

在许多癌症中，包括胃肠道癌（如散发性结肠癌和卵巢癌）的许多癌症已经报道了DNA不匹配修复（MMR）基因的异常。当我们研究了零星结肠癌的蛋白质表达异常的机制，即散发性结肠癌中代表性的MMR基因HMLH1的机理时，我们发现结果无法通过导致异常的已知概念来解释。因此，我们需要了解转录调节的细节。在这项研究中，我们计划在两个阶段研究HMLH1基因的转录调节机制：（1）识别基本的转录区域和（2）识别转录因子。今年，我们研究了与已经鉴定的蛋白结合位点（FP3，FP61和CCAAT-box）结合的蛋白质，这些蛋白质对HMLH1基因的转录调节很重要。首先，我们使用酵母（S. cerevisiae）的单杂交方法搜索了从人类滤液中的cDNA库中的结合蛋白，并发现40个克隆作为FP3结合蛋白的候选者。我们对18个克隆中的基本序列确定了18个克隆的爆炸搜索，并发现发现P29 GCIP相互作用的四个蛋白质基因的克隆。这四个克隆的所有ORF都是一致的，并包含全长cDNA（753bp）。其他克隆在帧中没有匹配，ORF短于70bp，因此这些克隆很可能没有编码结合蛋白。这表明仅P29被认为是FP3结合蛋白的有前途的候选者。 p29基因位于131-32区域，其中在包括零星结肠癌在内的许多癌症中看到缺失，及其与癌变的关联。预计将阐明分子生物学功能分析和临床标本异常的临床标本。此外，FP61和CCAAT-box结合蛋白也将成为未来的研究主题。