ミスマッチ修復遺伝子の転写制御機構の検討:転写因子の単離同定と役割の解明

错配修复基因转录控制机制的研究：转录因子的分离和鉴定及其作用的阐明

• 批准号: 13770720
• 负责人: 有田 通恒
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770720/
• 关键词: DNAミスマッチ修復遺伝子; hMLH1遺伝子; 大腸癌; 転写調節機構; 転写因子; 細胞株; プロモーター領域; cis-element; trans-acting factor

DNAミスマッチ修復(MMR)遺伝子の異常は散発性大腸癌などの消化器癌や卵巣癌など多くの癌で報告されている.代表的なMMR遺伝子hMLH1の散発性大腸癌におけるタンパク発現異常の機構について調べたところ,異常を引き起こす既知の概念では説明不可能な結果を得た.そこで転写制御の詳細を知る必要があった。本研究では,hMLH1遺伝子の転写制御機構について(1)転写必須領域の特定,(2)転写因子の同定の2段階で調べる計画を立てた.本年度は,すでに特定化したhMLH1遺伝子転写調節に重要な3カ所のタンパク結合部位(FP3,FP61,CCAAT-box)に結合するタンパクについて研究を行った.まず,これら結合部位をbait配列とし酵母(S.cerevisiae) one-hybrid法を用いてヒト胎盤由来cDNAライブラリーから結合タンパクを検索したところ,FP3結合タンパクの候補として40クローンが得られた.これらクローンのうち塩基配列が決定できた18クローンについてBLAST検索を行ったところ,p29 GCIP-interacting proteinの遺伝子が4クローン見出された.これら4クローンのORFはすべて一致しており,かつfull lengthのcDNA(753bp)を含んでいた.他のクローンではフレームが一致しておらず,またORFも70bp以下と短かったことから,これらクローンは結合タンパクをコードしていない可能性が大であった.このことから,p29のみがFP3結合タンパクの有力な候補と考えられた.p29遺伝子は散発性大腸癌を含む多くの癌で欠失が見られる1p31-32領域に位置することからも発癌との関連に興味が持たれた.今後,分子生物学的な機能解析ならびにp29に異常の認められる臨床検体の検索などによる発癌への関与の解明が期待される.また,FP61ならびにCCAAT-box結合タンパクについても今後の研究課題となった.

DNA repair (MMR) gene abnormalities are reported in sporadic colorectal cancer, digestive cancer, ovarian cancer, and multiple cancers. Representative of the MMR gene hMLH1 sporadic colorectal cancer, the mechanism of abnormal development, abnormal development, known concept, explanation impossible results.そこで転写制御の详细を知る必要があった。In this study, we established (1) the specific domain of hMLH1 gene,(2) the specific two-stage modulation scheme of hMLH1 gene. This year, we will conduct research on the binding of hMLH1 gene to the binding sites (FP3, FP61,CCAAT-box). The yeast (S.cerevisiae) one-hybrid method was used to detect the placenta origin cDNA. The FP3 binding site was identified by the yeast (S.cerevisiae) one-hybrid method. The p29 GCIP-interacting protein gene is found in the BLAST gene sequence. The ORF of this gene is identical, and the cDNA(753bp) is full length. He has the ability to combine the ORF 70bp lower and shorter than the ORF 70bp lower. The p29 gene is a powerful candidate for sporadic colorectal cancer. The p31-32 gene is a powerful candidate for sporadic colorectal cancer. In the future, functional analysis of p29, recognition of abnormalities, detection of clinical models, correlation with cancer development and elucidation are expected. FP61,FP61, FP 6

项目成果

Sugiyama H: "Differential inducibility of p53 downstream genes in human neuroblastoma cell lines"J Med Soc Toho. 50・1. 13-23 (2003)

Sugiyama H：“人神经母细胞瘤细胞系中 p53 下游基因的差异诱导性”J Med Soc Toho 50·1（2003）。

Arita M: "Multiple sites required for expression in 5'-flanking region of the hMLH1 gene"Gene. 306C・1. 57-65 (2003)

Arita M：“hMLH1 基因 5-侧翼区域的表达所需的多个位点”基因 306C·1。

Zhong X: "A single nucleotide polymorphism in the promoter region of the hMLH1 gene:Effect on transcriptional activity and application for a marker of detecting allelic loss"J Med Soc Toho. 48・2. 114-124 (2001)

钟X：“hMLH1基因启动子区的单核苷酸多态性：对转录活性的影响以及检测等位基因丢失的标记的应用”J Med Soc Toho 48·2（2001）。