膵β細胞の発生期における転写因子の相互作用および糖尿病の新たな病因の解明

胰腺β细胞发育过程中转录因子的相互作用及阐明糖尿病新发病机制

• 批准号: 14770599
• 负责人: 黒江 彰
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770599/
• 关键词: BETA2; cDNA; プロモーター

1)マウスBETA2プロモータ領域を含むcDNAを得るために、まずハムスタBETA2cDNAをプローブとしてmouse lambda genomic libraryのスクリーニングを行い、得たマウスBETA2cDNAをプローブとしてマウスの各臓器、および培養細胞のHIT-T15,MIN6より抽出したtotal RNAをNorthen blottingしたところ、HIT-T15,MIN6に加え、マウスの小脳にもBETA2の発現が見られ、BETA2が脳においても何らかの作用をしていることが示唆された。2)マウスBETA2プロモータ領域のうち、さまざまな長さのルシフェラーゼプロモータプラスミドを作成し、PDX-1,Pax6,Nkx6.1などの転写因子の発現ベクターとともにHepG2およびMIN6細胞にリポフェクション法とリン酸カルシウム法の両方を用いて遺伝子導入し、BETA2プロモータ領域のどの部位に結合し、どう作用しているのかを解明するために、活性の変化などについて検討している。その結果がいくつか出ており、調べた転写因子がBETA2プロモータ領域に結合して活性化に関与していると思われるものについてはゲルシフトアッセイおよびフットプリンティングにより結合を確認している。3)さらにtwo hybrid systemを用いてBETA2と、MODYの原因遺伝子であるHNF1α、HNF1β、HNF4αとの遺伝子領域での結合の有無、また結合がある場合にはその部位を確かめる事によってインスリンの合成や膵β細胞の発生に関与しているBETA2とMODYとの関わりを究明している。

1) マ ウ ス beta 2 プ ロ モ ー タ field contains を む cDNA を have る た め に, ま ず ハ ム ス タ BETA2cDNA を プ ロ ー ブ と し て mouse lambda genomic Library の ス ク リ ー ニ ン グ を い, have た マ ウ ス BETA2cDNA を プ ロ ー ブ と し て マ ウ ス の each viscera, お よ び culture cell の HIT - T15 MIN6 よ り spare し た total RNA を Northen Blotting し た と こ ろ, HIT - T15 MIN6 に え, マ ウ ス の small 脳 に も beta 2 の 発 が now see ら れ, beta 2 が 脳 に お い て も what ら か の role を し て い る こ と が in stopping さ れ た. 2) マ ウ ス beta 2 プ ロ モ ー タ field の う ち, さ ま ざ ま な long さ の ル シ フ ェ ラ ー ゼ プ ロ モ ー タ プ ラ ス ミ ド を make し, symbol - 1, Pax6, Nkx6.1 な ど の planning write factor の 発 now ベ ク タ ー と と も に HepG2 お よ び MIN6 cells に リ ポ フ ェ ク シ ョ ン method と リ ン acid カ ル シ ウ ム method の struck party を with い て heritage 伝 import し, beta 2 プ ロ モ ー タ field の ど の parts に combining し, ど う role し て い る の か を interpret す る た め に, active の variations change な ど に つ い て beg し 検 て い る. そ の results が い く つ か out て お り, べ た が planning write factor beta 2 プ ロ モ ー タ fields に し て activeness に masato and し て い る と think わ れ る も の に つ い て は ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ お よ び フ ッ ト プ リ ン テ ィ ン グ に よ り combining を confirm し て い る. 3)さらにtwo hybrid System を with い て beta 2 と, MODY の reason but 伝 child で あ る HNF1 alpha, beta, HNF4 HNF1 alpha と の heritage 伝 sub-fields で の combining の, ま た combining が あ る occasions に は そ の parts を か indeed め る matter に よ っ て イ ン ス リ ン の synthetic や Cui beta cells の 発 raw に masato and し て い る beta 2 と MODY Youdaoplaceholder0 と is related to わ と を research on て る る.