アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターを用いた頭頚部癌遺伝子治療と放射線併用

使用腺相关病毒（AAV）载体结合放射治疗的头颈癌基因治疗

• 批准号: 14770911
• 负责人: 金澤 丈治
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770911/
• 关键词: アデノ随伴ウイルスベクター; 頭頸部癌; 放射線治療; 単純ヘルペスチミジンキナーゼ; 二本鎖合成; 骨髄細胞

【目的】今回の研究は,頭頸部癌に対する新たな治療法の1つとしてアデノ随伴ウイルスベクターを用いた遺伝子治療の可能性を検討することを目的に行った.アデノ随伴ウイルスベクター(AAV)は,安全で宿主域も広く有用なベクターと考えられるが,一本鎖DNAであるAAVベクターが二本鎖となる効率が低く,遺伝子発現が不十分であることが欠点の1つである.私共は,これまでの研究で頭頸部癌細胞においてγ線がAAVベクターの二本鎖合成を促進し,導入遺伝子の発現を増強することを見出した.今回,臨床応用を目指してこの現象を利用した治療実験を行った.【方法】LacZ遺伝子または単純ヘルペスチミジンキナーゼ遺伝子を組込んだAAVベクター(AAVLacZ,AAVtkを作製し,これらをヒト喉頭癌由来のHEp-2細胞及びHeLa細胞に感染させ,γ線照射の有無による遺伝子発現効率の変化,ガンシクロビル(GCV)に対する感受性の差を検討した.更に,HEp-2細胞をヌードマウス皮下に移植し,形成した腫瘍にAAVベクターを感染させ,γ線照射の有無による腫瘍内での導入遺伝子の発現及びGCVに対する感受性の差を検討した.【結果】AAVtk/GCV単独でも癌細胞に対する十分な殺細胞効果が得られたが、γ線はこの効果を最高で約15倍まで増強した.この効果は,サザン解析の結果から放射線がAAVベクターの二本鎖合成を変換される過程を促進したためと考えられた.また,腫瘍内でのAAVLacZの発現はγ線で約3倍に増強され,これも同様の機序によるものと思われた.ヌードマウス皮下の腫瘍の増殖はAAVtk/GCV単独でも低下したが,γ線の併用により30日間完全に抑制された.以上よりγ線を併用したAAVベクターによる自殺遺伝子治療の有用性が動物個体レベルにおいても示唆された.

[Objective] To investigate the possibility of new therapeutic methods for head and neck cancer. AAV (AAV), security, host domain, useful, one-lock DNA, two-lock DNA, low efficiency, incomplete gene discovery. In this study, gamma rays from head and neck cancer cells were used to promote the synthesis of AAV molecules and enhance the expression of introduced genes. Today, the clinical application of this phenomenon is pointed out. [Methods] LacZ gene expression was determined by using AAVLacZ,AAVtk to control the expression of LacZ gene in HEp-2 cells and HeLa cells infected with laryngeal cancer. The sensitivity of LacZ gene expression to gamma irradiation was investigated. In addition,HEp-2 cells were transplanted subcutaneously to form tumors and infected with AAV vectors. The expression of introduced vectors in tumors with or without gamma irradiation and the difference in sensitivity to GCV were investigated. [Results] AAVtk/GCV ratio increased by 15 times compared with the highest ratio of AAVtk/GCV ratio. The result of this analysis is that the radiation is not stable. The AAVLacZ emission in the tumor was about 3 times stronger than that in the gamma ray, which was the same as that in the sequence. The growth of subcutaneous tumors was reduced by AAVtk/GCV alone, and the combination of gamma rays was completely suppressed by 30 days. The utility of suicide gene therapy in combination with gamma ray therapy in animals.