顎関節症初発因子としての酸化ストレスの重要性

氧化应激作为颞下颌关节疾病初始因素的重要性

• 批准号: 14771170
• 负责人: 岡本 亨
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771170/
• 关键词: フィブロネクチン; 滑膜細胞; MMP; ザイモグラフィー; TIMP; 顎関節症; 酸化ストレス

仮説1:酸化ストレスによって非酵素的に分解生成されたFn-fが直接もしくは間接的にMMPを活性化する。ファイブロネクチンの非酵素的分解産物のMMP産生への関与は陰性であった。一方、ファイブロネクチンの120kDaドメインがインテグリンを介して、MMP2、9の産生を向上させることをザイモグラフィーで確認した。ザイモグラフィーで得られたバンドがMMP2、9であることを二重チェックする目的で、SDS-PAGE後western blottingによってそれぞれがMMP2、9であることを確認した。ザイモグラフィーの結果同様、120kDaドメイン濃度依存的に、MMP2、9の産生が増大していた。よって、MMP2,9のupregulateには細胞外基質であるファイブロネクチン、特に120kDaドメインのインテグリンとの結合が必要であることが示唆された。今後は、顎関節症患者の滑液分析も平行して行い、特に分解産物に着目して分析を進めていく必要が確認された。仮説2:酸化ストレスを受けたTIMPのMMP結合能力は低下する。MMPの特異的阻害酵素であるTIMPは、reactive oxygenによってその阻害能力が低下することを報告した。さらに、顎関節症患者より得た滑液中のTIMPを、ポリクローナル抗体を使用し、免疫沈降法を行い、部分精製産物を得た。酸化ストレスを受けた際に生じる変化の一つであるcarbonyl基を調べた。その結果、顎関節症患者滑液中には、多量のcarbonyl基が存在していた。顎関節腔内に分泌されたTIMPは、酸化ストレスを受けることによってMMP阻害能力の低下が生じる。その結果相対的にMMP活性が高まり、基質が病的に分解されることが予測された。現在、発表準備中である。

1. Acidification of enzymes and their direct and indirect production of MMP The relationship between MMP production and non-enzymatic decomposition products of protein production The production of MMP2 and MMP9 was confirmed by the 120kDa temperature measurement of MMP2 and MMP9. After SDS-PAGE western blotting, MMP2 and 9 were identified. The results showed that MMP-2 and MMP-9 production increased in the concentration-dependent region of 120kDa. The upregulation of MMP-2,9 in extracellular matrix is necessary for the development of extracellular matrix, especially in the 120kDa region. In the future, synovial fluid analysis of patients with jaw arthrosis should be carried out in parallel, and the analysis of special decomposition products should be carried out in order to confirm it. Conclusion 2: The binding ability of TIMP to protein is low. MMP specific inhibitor TIMP is reported to have a low inhibitory activity against reactive oxygen. TIMP in synovial fluid was obtained from patients with jaw arthrosis, and the use of anti-TIMP antibody, immuno-sedimentation method, and partial purification products were obtained. Acidification is a process of transformation. As a result, a large amount of carbonyl groups were present in synovial fluid of patients with jaw arthrosis. The secretion of TIMP in the jaw joint cavity is reduced. The results showed that MMP activity was high and matrix decomposition was predicted. Now, the table is ready.