関節リウマチ由来滑膜細胞のメカニカルストレス受容メカニズムの解明

阐明类风湿关节炎滑膜细胞的机械应力接收机制

• 批准号: 20K11297
• 负责人: 奥村 裕
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Osaka University of Human Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K11297/
• 关键词: 関節リウマチ; 滑膜細胞; 機械的刺激; CRACチャネル; CRAC阻害薬; メカニカルストレス; カルシウムイメージング

滑膜細胞の力学的刺激（shear stress; SS）に対する細胞内カルシウムを介したシグナル伝達経路においてCRACの関与を明らかにすることを目的とし研究を実施した。これまでに滑膜細胞にSSとしてガラス製マイクロピペットから窒素ガスを噴出させて機械的刺激（shear stress; SS）を加えることにより、滑膜細胞内のCa2+濃度([Ca2+]i )の上昇が確認された。YM-58483を添加すると、Normal FLSの第1回目の反応に対する第2回目の反応は約63.6%に減少したが、RA FLSでは約30.9%とNormal FLSに比べ有意に減少させた。このことから、CRACチャネルの活性化がRA FLSの応答に寄与していることが示唆された。HC-067047を添加すると、Normal FLSの第1回目の反応に対する第2回目の反応は約33.4%に減少し、RA FLSでは約40.7％に減少した。また、Ca2+フリーの条件下におけるSSに対する細胞内のCa2+濃度([Ca2+]i )の変化を検証した結果、機械的刺激に対する1回目の応答は観察されたものの、2回目の応答は観察されなかった。このことから、1回目の応答ではERに保存されているCa2+が放出された可能性が示唆された。これらの結果をふまえ、細胞内のORAI1、STIM1、TRPV4タンパク質の発現をウェスタンブロッティング (Western blotting; WB) の手法により検証を実施した。その結果、Normal FLSに比べ、RA FLSにおいて、ORAI1、STIM１の発現が増加しいる傾向が観察された。TRPV4の発現については同程度である傾向が観察された。

Synovial cells の mechanical stimulation (shear stress; SS) に す seaborne る intracellular カ ル シ ウ ム を interface し た シ グ ナ ル 伝 da 経 road に お い て CRAC の masato Ming ら を か に す る こ と を purpose と し research を be applied し た. こ れ ま で に synovial cell に SS と し て ガ ラ ス system マ イ ク ロ ピ ペ ッ ト か ら smothering element ガ ス を overflowing さ せ て mechanical stimulation (shear stress; SS) を plus え る こ と に よ り, synovial cell の Ca2 + concentration ([Ca2 +] I) rising の が confirm さ れ た. YM - 58483 を add す る と, Normal FLS の 1 pa2 の anti 応 に す seaborne る 2 pa2 の anti 応 は about 63.6% に reduce し た が, RA FLS で は about 30.9% と Normal FLS に than べ intentionally に reduce さ せ た. こ の こ と か ら, CRAC チ ャ ネ ル の activeness が RA FLS の 応 answer に send and し て い る こ と が in stopping さ れ た. HC - 067047 を add す る と, Normal FLS の 1 pa2 の anti 応 に す seaborne る 2 pa2 の anti 応 は about 33.4% に reducing し, RA FLS で は about 40.7% に reduce し た. ま た, Ca2 + フ リ ー の conditions に お け る SS に す seaborne る intracellular の Ca2 + concentration ([Ca2 +] I) の variations change を 検 card し た results, mechanical stimulation に す seaborne る 1 pa2 の 応 answer は 観 examine さ れ た も の の, 2 pa2 の 応 answer は 観 examine さ れ な か っ た. こ の こ と か ら, 1 pa2 の 応 answer で は ER に save さ れ て い る Ca2 + が release さ れ が た possibility in stopping さ れ た. こ れ ら の results を ふ ま え, intracellular の ORAI1 and STIM1, TRPV4 タ ン パ ク qualitative の 発 now を ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ (Western blotting, WB) の gimmick に よ り 検 card を be applied し た. そ の results, Normal FLS に than べ, RA FLS に お い て, ORAI1 and STIM1 の 発 now が raised し い る tendency が 観 examine さ れ た. TRPV4 shows the same degree of である tendency to が観 observe された.