アンチザイム標的分子の探索

寻找抗酶靶分子

• 批准号: 14771301
• 负责人: 小池 千恵子
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Osaka Bioscience Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771301/
• 关键词: アンチザイム; プロテオリシス; オリニシンデカルボキシラーゼ; オルニシンデカルボキシラーゼ

ユビキチン非依存性プロテオリシスを誘導することで知られるアンチザイムは、歴史的にその標的としてオルニシンカルボキシラーゼ(以下ODCと略す)のみが知られ、分解誘導メカニズムが研究されてきた。しかしながらごく近年我々の研究も含め、アンチザイムをメディエーターとしたユビキチン非依存性プロテオリシスがODC分解以外にも広範な細胞機能制御に関わる可能性を示唆するデータが報告されている。そこで私はアンチザイムの新しいターゲットを探索することを目的とし、アンチザイムをベイトとしてYeast two-hybrid screenを行った。報告者は23kDを産生する2番目のATGからのアンチザイム全長および、C末110アミノ酸をコードする配列をbaitとしてpLexAベクターおよびp8op-lacZベクターに組み込み、EGY48酵母株に形質転換し、組み込んだベイトタンパクが酵母において発現していることをLexAモノクローナル抗体を用いてウエスタンブロッティングにより確認した。その後種々の濃度の3ATを含有したSDプレートにベイトを形質転換した酵母を蒔き、酵母の生育しない至適3AT濃度を同定した。実際のスクリーニングにはpB42ADベクターに組み込んだP0からP4ステージのマウスcDNAライブラリーを使用した。出現したコロニーの多くはβガラクトシダーゼ活性を示したが、再度トランスフォーメーションしたとき消失したクローンも多く、また再現性のあったクローンの重なりは少なく、シークエンスの結果、特異的な相互作用であると考えられるものも少なかった。現在、C末をさらにいくつかに分けてbaitとしスクリーニングを行うとともに、可能性のあるクローンについて培養細胞にてアンチザイムとの相互作用を確認している。

In the case of non-dependence, the information is collected and analyzed according to the information collected. In recent years, our research has focused on the possibility of cell function control in addition to ODC decomposition. The new two-hybrid screen is designed to be used as a way of exploring new ideas. The reporter confirmed the identity of the yeast strain EGY48 by baiting the 23kD DNA sequence of ATG, C110 and C110. The concentration of 3AT in the seed is constant. In fact, the pB42AD is used to organize the pB42AD. The results of this interaction are as follows: Now, the interaction between the two cultures is confirmed.

项目成果

Furukawa, A: "The mouse Crx 5'-upstream transgene sequence directs cell-specific and developmentally regulated expression in retinal photoreceptor cells"J Neurosci.. 22・5. 8 (2002)

Furukawa, A：“小鼠 Crx 5-上游转基因序列指导视网膜感光细胞中细胞特异性和发育调节的表达”J Neurosci.. 22・5.8 (2002)