小腸放射線障害治療に向けて上皮細胞の分化と再生に関与する遺伝子の研究

小肠放射损伤治疗中上皮细胞分化与再生相关基因的研究

• 批准号: 14780424
• 负责人: 上坂 敏弘
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780424/
• 关键词: crypt; Cdx2; IEC-6; microarray; E2F3; differentiation; regeneration; intestine; Microarray; HB-EGF; 腸

主に腸で発現する転写調節因子Cdx2に着目し、Cdx2の標的遺伝子を明らかにしていくことによって、腸上皮細胞の細胞増殖、分化制御、さらには細胞死制御機構の解明と分化マーカーの同定を目指した。Cdx2の発現制御が可能なラット胎児由来未分化腸上皮細胞株IEC-6 Tet-Off/Cdx2を用いて、Cdx2の発現誘導に伴い転写促進もしくは転写抑制される遺伝子をオリゴヌクレオチド・マイクロアレイ(CodeLink UniSet Rat I Bioarray, Amersham)を用いて9,906種の遺伝子について調べた。現在23種類の遺伝子がCdx2によって発現上昇してくることをRT-PCRによって確認している。これらの内、ゲノム情報がわかっているものに関しては、プロモーター領域と予想される上流域においてCdx2結合部位配列(TTTAC/T)の検索を行った。この結果をもとに、ルシフェラーゼを用いたプロモーターアッセイ、ゲルシフトアッセイ、クロマチン沈降法を行い、Cdx2によって直接転写調節されることを確認した。これにより、転写調節因子E2F3、17β-hydroxysteroid dehydrogenase type 2、TM4SF4などがCdx2の標的遺伝子であることが示された。また、免疫組織化学的手法やin situ hybridizationにより、腸における発現分布を解析しているが、多くの遺伝子は、crypt上皮細胞で発現していることが明らかになってきた。本研究により同定されてきた遺伝子群の情報から、Cdx2の下流のシグナル伝達経路やcrypt上皮組織の新たな生理的役割が明らかになってきたので、さらなる解析を行いたい。また、TM4SF4は膜タンパクであり、crypt-villus部位から絨毛先端にかけて発現していることから、分化マーカーとして有用である可能性が高い。

The expression of Cdx2 in intestinal epithelial cells is regulated by the expression of Cdx2 target gene. The expression of Cdx2 target gene in intestinal epithelial cells is regulated by the regulation of cell proliferation, differentiation, and the regulation of cell death. Cdx2 gene expression may be regulated by 9,906 genes from undifferentiated intestinal epithelial cell line IEC-6 Tet-Off/Cdx2. Cdx2 gene expression may be induced by CodeLink UniSet Rat I Bioarray (Amersham). Now 23 species of DNA have been identified by RT-PCR. In this case, the information on the binding sites of Cdx2 in the upper watershed (TTTAC/T) is displayed. The results of this study are as follows: The regulatory factors E2F3, 17β-hydroxystyroid dehydrogenase type 2, TM4SF4, Cdx2 and Cdx2 are described in this paper. Immunohistochemical methods were used to analyze the distribution of situ hybridization and crypt epithelial cells. The purpose of this study is to analyze the information of the same gene subgroup, the downstream of Cdx2 and the new physiological function of the crypt epithelial tissue. TM-4SF-4 has a high probability of developing and differentiating at the site of crypt-villus

项目成果

Toshihiro Uesaka: "Heparin-binding EGF-like growth factor gene transcription regulated by Cdx2 in the intestinal epithelium"American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 283(4). G840-G847 (2002)

Toshihiro Uesaka：“肠上皮中 Cdx2 调节的肝素结合 EGF 样生长因子基因转录”美国生理学胃肠和肝脏生理学杂志。

Toshihiro Uesaka, Noriko Kageyama, Hiromitsu Watanabe: "Identifying target genes regulated downstream of Cdx2 by microarray analysis"Journal of Molecular Biology. 337. 647-660 (2004)

Toshihiro Uesaka、Noriko Kageyama、Hiromitsu Watanabe：“通过微阵列分析识别 Cdx2 下游调节的靶基因”分子生物学杂志。