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炎症性腸疾患の病態に関わるCDX2を介した粘膜免疫防御機構の解明とその治療応用

阐明CDX2介导的炎症性肠病病理学粘膜免疫防御机制及其治疗应用

基本信息

批准号：
16H06225
负责人：
中谷真子
金额：
$ 16.22万
依托单位：
University of Fukui
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに、in vitroの実験において、腸上皮細胞株に細菌（shigella flexneri）を感染させたところ、CDX2は腸上皮細胞内に侵入した細菌の増殖を顕著に抑制することを明らかにしている。本年度は、CDX2遺伝子改変マウスを用いて、マウス腸管に感染する病原性大腸菌による感染実験を行った。細菌感染には、Citrobacter rodentium、EHEC EDL933、EHEC 86-24を用いて経口感染させた。しかしながら、SPF環境下で飼育したマウスでは腸内細菌叢により、感染させた細菌が排除されて感染効率が低かったため、抗生物質（ampicillin、kanamycin）を自由飲水させ、常在細菌の排除を行った。3日間の抗生物質による前処理後、C. rodentium、EHEC EDL933を経口感染させ、感染後も抗生物質を自由飲水させ、糞便中の細菌数を数えた。その結果、CDX2遺伝子改変マウスにおける糞便中の細菌数は野生型に比べ多く、腸管での細菌の増殖、および排除にCDX2が関与している事がin vivoにおいて明らかとなった。また、腸上皮細胞株の細胞質において、内因性のCDX2とATG7が結合することを明らかにしている。そこで、GST-CDX2のdeletion mutantを作製し、GST pull downによってATG7との結合部位の同定を試みた。Full lengthのGST-CDX2とATG7との結合は確認する事が出来たが、結合部位の同定については検討中である。

CDX2 can inhibit bacterial colonization by invading intestinal epithelial cells. This year, CDX2 gene mutation has been used to detect pathogenic E. coli infection. Pathogenic bacteria such as Citrobacter rodentium, EHEC EDL933, EHEC 86-24, etc. In SPF environment, the bacteria in the intestine are cultured, infected, and eliminated. The infection rate is low. Antibiotics (penicillin, kanamycin) are free to drink water, and bacteria are often eliminated. 3. Antibiotics in the daytime, C. Rodentium, EHEC EDL933 Oral infection, free access to water after infection, bacterial count in feces The results showed that CDX2 gene expression changed the number of bacteria in feces compared with wild type, and the number of bacteria in intestinal tubes increased. CDX2 gene expression changed the number of bacteria in vivo compared with wild type. Cytoplasmic and endogenous CDX2 and ATG7 binding in intestinal epithelial cell lines GST-CDX2 deletion mutant control, GST pull down, ATG7 binding site identification Full length of GST-CDX2 and ATG7 are combined to confirm the identity of the binding site.