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ABCAサブファミリータンパク質(ABCA1,ABCA7)の機能解析

ABCA亚家族蛋白（ABCA1、ABCA7）的功能分析

基本信息

批准号：
14780489
负责人：
松尾道憲
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

アポリポタンパク質AIとの相互作用に関与すると考えられる、ABCA1タンパク質の2つの細胞外領域(ECD-1,ECD-2)の機能を詳細に調べるため、ECDを大腸菌で発現させ、精製した。ECD-2は単独では発現しないが、ECD-1との融合タンパク質として発現させることに成功した。これを親和性クロマトグラフィーで精製することができた。ABCA1のN末領域が翻訳後切断を受ける可能性を検討するため、N末端領域とECD1を動物培養細胞(HEK293細胞)で発現させ、膜画分に局在することを示した。N末端領域が切断を受ける可能性を示し、さらにECD1がジスルフィド結合によって他のタンパク質と相互作用して、膜画分に留まる可能性を示唆した。ABCA1とABCA7の機能を調べるため、全長タンパク質をそれぞれ動物培養細胞で発現させ、相互作用する分子、コレステロール、リン脂質の細胞外への排出活性を検討した。PDZタンパク質の1つα1-syntrophinがABCA1のC末端と相互作用することを見いだし、α1-syntrophinがABCA1の分解を抑制することで、apoAI依存的なコレステロール排出を促進することを明らかにした。また、ABCA7をHEK293細胞で発現させると、ABCA1と同様に細胞膜上に局在し、細胞からのapoAI依存的なコレステロール、リン脂質の排出が観察されることを明らかにした。さらに、ABCA7のスプライシングバリアントを単離し、バリアントが小胞体に局在してコレステロール、リン脂質排出には働かないことを示した。このことから、選択的スプライシングがABCA7の翻訳後制御に関わる可能性を示唆した。

The function of extracellular domain (ECD-1,ECD-2) of ABCA-1 and ABCA-2 is regulated in detail. ECD-2 was successfully developed in isolation and ECD-1 was successfully developed in fusion. This is the first time I've ever been in a relationship with someone else. The possibility of ABCA1 N-terminal cleavage after inversion was discussed. The N-terminal domain and ECD1 were found in cultured animal cells (HEK293 cells). The membrane separation was shown. The possibility of N-terminal domain cleavage and membrane separation is shown. To investigate the functional modulation of ABCA1 and ABCA7, the development of full-length proteins in cultured animal cells, the interaction of molecules, molecules, and extracellular lipid excretion activities. 1-syntrophin inhibits ABCA1 decomposition and apoAI-dependent C-terminal interaction. ABCA7 and HEK293 cells were found in the same way as ABCA1 cells, and apoAI-dependent cells were found in the same way. In addition, ABCA7 has been shown to be able to remove lipids from cells. The possibility of ABCA7's post-conversion control was demonstrated.