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コレステロール排出に関与するABCタンパク質の機能解析

参与胆固醇流出的 ABC 蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
16770095
负责人：
松尾道憲
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

複数のABCタンパク質(ABCA1,ABCG1,ABCG5,ABCG8)が、生体内のコレステロール恒常性維持に重要な役割を果たすが、コレステロールを基質として輸送するのか、あるいはリン脂質輸送によって細胞膜環境を変えることで間接的にコレステロール輸送に関与するかなど、その分子機構は明らかではない。ABCタンパク質の輸送基質と輸送機構を解析することで、コレステロール恒常性機構を明らかにすることを目的として実験を行った。動物培養細胞HEK293のABCG1安定発現株を樹立し、ABCG1発現細胞から、コレステロールとコリンリン脂質が排出されること、高密度リポタンパク質(HDL)存在下で排出が増加することを見出した。質量分析と薄層クロマトグラフィー解析から、リン脂質の内、ABCA1発現細胞ではホスファチジルコリンが主に排出されるのに対し、ABCG1発現細胞ではホスファチジルコリンとスフィンゴミエリンが排出されることを明らかにした。ABCA1を昆虫培養細胞で大量発現させ、ニッケルレジンカラムを用いて精製した。精製標品のATP加水分解活性を測定し、ABCA1がATP加水分解活性を持つこと、脂質に再構成するとその活性が上昇することを明らかにした。ABCA1のWalkerAモチーフのリジン変異体では活性が低かったことから、加水分解活性がABCA1特異的なものであることを明らかにした。様々なリン脂質組成のリポソームに再構成して活性を検討した結果、ABCA1がコレステロールとホスファチジルコリンを基質として輸送し、アポリポタンパク質AIに受け渡すことが示唆された。これらのことから、抹消細胞でABCA1とABCG1が協調してコレステロールを排出し、HDL形成に関与する可能性を示した。

A plurality of ABC molecules (ABCA1, ABCG1, ABCG5, ABCG8) are important for maintaining cell homeostasis in vivo, and the molecular mechanisms involved in lipid transport, cell membrane environment, and indirect cell transport are clearly identified. ABC transport matrix and transport mechanism analysis, transport matrix and transport mechanism analysis ABCG1 stable cells of HEK293 in animal culture were established, ABCG1 cells were found to be active, and lipid excretion was increased in the presence of high density lipoprotein (HDL). Quality analysis: TLC analysis, lipid analysis, ABCA1 discovery cells, ABCG1 discovery cells, ABCA1 discovery cells, ABCA1 discovery cells. ABCA1 is produced in large quantities in insect culture cells and refined in the medium. Determination of ATP hydrolysis activity of refined standard, ABCA1, ATP hydrolysis activity, lipid recombination activity, and increase in activity ABCA1's WalkerA activity is low, its hydrolytic activity is high, and ABCA1's activity is high. The results showed that ABCA1 had a high lipid content and a high lipid content, and that ABCA1 had a high lipid content and a high lipid content. The possibility that ABCA1 and ABCG1 are coordinated and released from the system is shown.