肝臓の領域特異的分化を制御する転写調節因子の同定と機能解析

控制肝脏区域特异性分化的转录调控因子的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
14704071
负责人：
横内裕二
金额：
$ 17.97万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は昨年度おこなったdegenerate RT-PCRによって同定された遺伝子群のうち、Id関連遺伝子のひとつであるId3に着目しその機能解析を行った。我々は本遺伝子の肝発生における機能を明らかにする目的で、肝発生過程におけるその詳細な発現パターンを解析した。Id3は肝原基が形成された直後である発生段階14において肝原基全体で発現していた。しかし、近位遠位軸にそった形態学的特徴が顕著になる発生段階20では、腸管に関して近位側の総胆管内胚葉におけるその発現は消失する一方で、遠位側の肝臓本体における発現は継続していた。すなわち、肝-胆管系において、Id3は遠位特異的に発現する。次にそのmRNA量の経時的な変化を3日-14日胚肝臓において計測したところ、3日目と6日目に発現のピークがあり、6日以降からは急速に減少することが明らかになった。この結果はId3が肝臓発生の異なった二つの発生段階において機能している可能性を示唆する。次にId3の機能を明らかにするために、Id3に対するsiRNAを作成し、肝内胚葉に導入した際の効果を調べた。Id3特異的siRNAの導入により肝臓が縮小した。一方、器官培養系を用いてId3過剰発現の効果を検討したところ、肝臓内胚葉の増殖が促進された。さらにin ovoにおいて肝臓内胚葉特異的にId3 cDNAを恒常的に発現したところ、ニワトリ肝臓の分化マーカーであるalbuminの発現が抑制された。以上の結果はId3が肝-胆管系における遠位側、すなわち肝臓内胚葉の領域特異的増殖の促進因子であることを強く示唆している。また今回の結果はId3が肝発生分化状態の維持に関与している可能性を示唆する。

今年，我们专注于ID3（ID3）是与ID相关的基因之一，来自去年由退化RT-PCR鉴定的基因组，并进行了功能分析。我们分析了该基因在肝发育过程中的详细表达模式，目的是阐明该基因在肝发育中的功能。肝原基形成后，立即在发育阶段14的整个肝原基中表达了ID3。然而，在发育阶段20中，当沿近端远端轴的形态学特征变得突出时，它在公共胆管内胚层近端相对于肠道的表达被废除，而在远端肝脏体内的表达持续。也就是说，ID3在肝脏底孔系统中特别表达。接下来，在第3-14天，在胚胎肝脏中测量了mRNA量的变化，并且发现该表达在第3和第6天达到峰值，并且从第6天开始迅速下降。该结果表明，ID3可能在肝发育的两个不同发育阶段起作用。接下来，为了阐明ID3的功能，对ID3创建了siRNA，并在将其引入肝内胚层时检查了其效果。引入ID3特异性siRNA减少了肝脏。另一方面，当使用器官培养系统研究ID3过表达的效果时，促进了肝内胚层的增殖。此外，在OVO中，在肝内胚层中特异性ID3 cDNA的本构表达抑制了白蛋白的表达，白蛋白的表达是鸡肝中分化的标志。上述结果强烈表明ID3是肝脏底孔管系统远端区域特异性增殖的启动子，即肝内胚层。目前的结果还表明，ID3可能参与维持肝发育分化。