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免疫標識法によるスギ心材ノルリグナンの分布の可視化

通过免疫标记可视化雪松心材中正木脂素的分布

基本信息

批准号：
14760111
负责人：
今井貴規
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14760111/
关键词：
免疫標識ノルリグナンアガサレジノールスギ免疫標品

项目摘要

昨年度までに、アガサレジノールのような低分子化合物の免疫電子顕微鏡観察を目指すとき、その化合物が、試料調製(植物組織の固定・脱水・包埋、超薄切片の調製、および超薄切片の抗血清処理)において本来の存在場所から移動し、さらに組織外へ溶脱した可能性が示され、この問題の対策として、(1)低温下・短時間での試料調製、(2)試料の凍結乾燥、(3)試料のカフェイン溶液処理、を試みた。しかしながら、免疫標識の十分な改善は達成されなかった。本年度、「前固定免疫標識法(あらかじめ低分子量物質と抗体タンパクとを結合させる、タンパク質の固定は比較的容易である)」を試みた。この方法では、Fab断片の調製が必要となるため、その調製を行った。まず親和クロマトグラフ法によって抗アガサレジノール抗血清からIgG画分を分取し、続いてこの画分をパパインで酵素分解し、分解物から親和クロマトグラフ法によってFab断片を単離した。得られたIgG画分およびFab断片の抗体活性を免疫検定した。その結果、IgG画分は認識選択性は向上したものの、活性自体は低下し、Fab断片に関しては濃度が極めて薄く、活性も低下した。これらのIgG画分およびFab断片は、免疫組織化学的検討には不適当であり、血清の精製方法を検討する必要がある。

Last year, immuno-electronic microanalysis of low molecular weight compounds was used to detect the possibility of transfer and dissolution of low molecular weight compounds (fixed dehydration entrapment of plant tissues, ultrathin sections, ultrathin sections and antiserum antibodies). To solve the problem, (1) to prepare the raw material at low temperature for a short time, (2) to dry the raw material, and (3) to adjust the solution and test the temperature. The knowledge of immunity has been greatly improved and has become a serious problem. This year, the "pre-fixed immune labeling method, which is easy to use in combination with low molecular weight antibodies and low molecular weight antibodies, has been tested." The method, the Fab fragment, the necessary data, the line, the line. The antisera were separated from IgG, the antisera were separated, the enzymes were separated, the decomposed products were isolated, and the Fab fragments were isolated. IgG drawing score, Fab fragment, antibody activity and immune assay were obtained. The results showed that the results of IgG painting showed that the selection was positive, the activity was low, the activity was low, the Fab fragment was thin, the activity was low. The results of IgG analysis, Fab fragments, immunocytochemistry and serum seminal methods were not suitable for each other.