核異型関連遺伝子のGFP融合蛋白質を利用した探索

使用 GFP 融合蛋白搜索核异型性相关基因

• 批准号: 14770089
• 负责人: 藤井 元
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770089/
• 关键词: 核異型; 遺伝子導入; スクリーニング; GFP; IRES; 蛍光顕微鏡; 核形態; 多検体; プラスミド調整

病理学における大きな診断要素とされている核異型事象を、分子細胞生物学的に遺伝子レベルで解明することを目指して本実験は計画された。すなわち強制発現プロモーター下流に全長のcDNAライブラリーをdirectionalに組み込み、さらにその下流にバイシストロニックな共発現が可能になるIRES部位を介しで導入マーカー兼核形態観察マーカーである核局在性のGFP遺伝子を配したベクター系をスクリーニングに用いることで、遺伝子導入された細胞のみで核の形態が蛍光顕微鏡下で観察可能になるという、独創的実験系を利用した遺伝子探索計画である。ホスト細胞やベクターの改変などを詳細に行うことで昨年度有効性を確認したこの実験系を利用して、今年度は順調に核の形態変動を指標としたスクリーニングを行った。当初の予定通り半自動化した機械による陽性クローン選択と同時に、肉眼観察によるより詳細な判別を並行利用したため、当初の予想より一次選択で時間がかかってしまったものの、数的に目安となる目標であった約20000クローンのスクリーニングは終了した。より確実な原因遺伝子を選択する目的で数回にわたり選択プロセスを繰返し、更にスクリーング過程で混入した混在クローンから原因遺伝子を取捨して選び出した結果、24個の核形態変化を惹起する遺伝子を選び出した。これらの遺伝子としては核内移行・核外移行関連遺伝子やアポトーシス関連遺伝子など、核の形態変動を引き起こす可能性が高い遺伝子が過半を占める一方、現時点で全く機能不明な遺伝子や、従来から解析されているものの核形態に関連する機能などは全く想定されていない遺伝子などがあり、その内訳は多岐に亘っていた。現在核形態に関して新規の機能が想起されるような遺伝子や特徴的な形態変化を引き起こす9個の遺伝子について更なる解析を行っている。

Histopathology, nuclear phenomena, molecular biology, cellular biology, cellular biology, molecular biology, biology, In this system, you can see that it is possible to transfer the information in the IRES part of the system and the nuclear configuration to the nuclear bureau in order to improve the performance of the GFP system. In this paper, you can see that it is possible to improve the overall performance of the directional system. In this case, you can find out that there may be a problem in the light, and the only one is to explore the plan by making use of it. In the past year, we made sure that we used the information system to make sure that we were using it. This year, we have made sure that we have made use of the information. This year, we have made sure that we are using the information system. At the beginning, it was recommended that semi-automatic mechanical equipment was selected at the same time, and it was detected by the naked eye that it was possible to make use of the machine at the same time. At first, it was intended to make use of the machine at the same time, and the number of customers who wanted to choose the machine at one time was about 20000 per cent. Make sure that the cause sub-selection is necessary, and the purpose is to make sure that the reason is returned, that the process is mixed, and that the results are selected, and the results are selected in the 24 nuclear tests that cause you to select the results. The possibility that the nuclear configuration will lead to a crash, the possibility that more than half of the population will account for more than half of the total number of users, and that the full machine at this point in time will not be able to understand the situation. In order to analyze the situation, we need to know that there is a high level of information in the system, and that there is a lot of information in the system. At present, the new rules and regulations of the nuclear security system can be used to analyze the data of the nine child computers.

项目成果

Y.Yamamoto, G.Eujii.et al.: "Overexpression of orphan G-protein-coupled receptor, Gpr49, in human hepatocellular carcinomas with β-catenin mutations"Hepatology. 37(3). 528-533 (2003)

Y.Yamamoto，G.Eujii.et al.：“孤儿 G 蛋白偶联受体 Gpr49 在具有 β-连环蛋白突变的人肝细胞癌中的过度表达”Hepatology 37(3) (2003)。

Saito A, Fujii G, Sato Y, Gotoh M, Toda G, Hirohashi S.: "Detection of genes expressed in primary colon cancers by in situ hybridisation : overexpression of RACK 1."Mol.Pathol.. 55(1). 34-39 (2002)

Saito A、Fujii G、Sato Y、Gotoh M、Toda G、Hirohashi S.：“通过原位杂交检测原发性结肠癌中表达的基因：RACK 1 的过度表达。”Mol.Pathol.. 55(1)。