HIV-1複製機構におけるポリADP-リボース合成酵素の役割についての解析
聚ADP核糖合酶在HIV-1复制机制中的作用分析
基本信息
- 批准号:14770131
- 负责人:
- 金额:$ 1.98万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
- 财政年份:2002
- 资助国家:日本
- 起止时间:2002 至 2004
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
前年度まで、PARP-1ノックアウトマウス由来のPARP-1-/-細胞を用いた解析を行い、マウス細胞に一過性に感染させることが可能な、遺伝子組み換え型ルシフェラーゼレポーターHIV-1(pNL-Luc)の感染効率が、PARP-1-/-細胞では対照細胞に比べて著明に低下していることがわかった。また、PARP-1-/-細胞ではHIV-1のプロモーターが活性化しにくいことがわかった。更に、PARP-/-細胞において、Histone acetyltransferase(HAT)、p300/CBPおよびP/CAFの発現が、遺伝子発現レベルで低下していることを示唆する解析結果を得た。HATはHIV-1遺伝子発現の活性化に重要な役割を担う因子であることから、HATの発現量が低下している現象は、PARP-1の欠損によりHIV遺伝子発現の程度が低下する要因の一つと考えられる。これらの解析結果は、HIV-1の複製制御機構、特にRNA転写機構にPARP-1が関与していることを示唆している。一方、HIV-1の自然宿主はヒト細胞であり、マウス細胞におけるHIV-1の増殖は、ウイルス生活環の複数の過程で制約を受けている。すなわち、マウス細胞だけを用いた実験系では、HIV-1増殖に最適な条件下での解析が不可能である。今年度、ヒト細胞でのHIV-1増殖におけるPARP-1の役割を解析する為に、ヒトPARP-1の発現を特異的に抑制するsmall interfering RNA(siRNA)を作製した。作製したsiRNAをヒト培養細胞、HeLaおよびJ111細胞に一過性導入すると、PARP-1の発現は著明に低下した。そして、PARP-1の発現が低下した状態の細胞に上記のpNL-Lucを感染させると、その感染効率は低下していた。また、PARP-1 siRNAのMAG工C5A細胞への導入は、染色体組み込み型HIV-1プロモーターのTNF-α依存的な活性化の程度を低下させた。これらの解析結果は、ヒト細胞においても、PARP-1が効率の良いHIV-1遺伝子発現に必要であること、PARP-1が抗HIV-1薬剤の開発において、その標的因子と成りうることを示唆している
In the past year, PARP-1-/-cells from which it originated were analyzed for use in the analysis, and their cells were transiently infected. The infection rate of PARP-1-/-cells against HIV-1(pNL-Luc) was lower than that of PARP-1-/-cells. PARP-1-/-cells are activated by HIV-1. In addition, PARP-/-cells, Histone acetyltransferase(HAT), p300/CBP and P/CAF were analyzed. HAT plays an important role in the activation of HIV-1 gene expression, HAT production is low, PARP-1 is deficient, and HIV gene expression is low. The analysis results showed that the replication control mechanism of HIV-1 and the specific RNA writing mechanism of PARP-1 were related to the development of HIV-1. The natural host of HIV-1 is a complex process that regulates HIV-1 reproduction and its life cycle. It is impossible to analyze HIV-1 under optimal conditions. This year, we have developed small interfering RNA(siRNA) to analyze the role of PARP-1 in HIV-1 proliferation in human cells and specifically inhibit the expression of PARP-1. The expression of PARP-1 in cultured cells, HeLa cells and J111 cells was significantly reduced due to the transient introduction of siRNA. The expression of PARP-1 was lower in cells infected with pNL-Luc, and the infection rate was lower. In addition, the introduction of PARP-1 siRNA into MAG C5A cells reduced the level of TNF-α-dependent activation of genome-specific HIV-1 proteins. The analysis results show that PARP-1 is necessary for the development of anti-HIV-1 drugs, and that PARP-1 is a target factor for the development of anti-HIV-1 drugs.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Katsuya, Ota: "Expression of histone acetyltransferases was down-regulated in poly(ADP-ribose)polymerase-1-deficient murine cells."Biochemical and Biophysical Research Communications. 310・2. 312-317 (2003)
Katsuya, Ota:“聚(ADP-核糖)聚合酶 1 缺陷的小鼠细胞中组蛋白乙酰转移酶的表达下调。”《生物化学和生物物理研究通讯》310·2(2003)。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
RNA interference directed against poly(ADP-Ribose) polymerase 1 efficiently suppresses human immunodeficiency virus type 1 replication in human cells
- DOI:10.1128/jvi.78.16.8931-8934.2004
- 发表时间:2004-08-01
- 期刊:
- 影响因子:5.4
- 作者:Kameoka, M;Nukuzuma, S;Yoshihara, K
- 通讯作者:Yoshihara, K
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