下部食道括約部(LES)に発現する新規コラーゲン分子に関する研究

食管下端括约肌（LES）表达的新型胶原蛋白分子的研究

• 批准号: 14770237
• 负责人: 住吉 秀明
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: 大分医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770237/
• 关键词: コラーゲン; 遺伝子ノックアウト; 下部食道括約筋(LES); 抗体作製; 透過型電子顕微鏡; 下部食道括約部(LES); Transdifferentiation; 電気生理学

1)特異的抗体作製と免疫組織染色。XIX型コラーゲンのN末端側とC末端側の非コラーゲンドメインのcDNAよりGST融合タンパク質を作製し、それぞれから抗原に対して十分な力価を持つモノクローナル抗体とポリクローナル抗体を作製した。この抗体を用いてマウス20〜30匹分の脳組織からのコラーゲン抽出物に対するウエスタンブロットを行ったところ、XIX型コラーゲンのバンドが検出され、KOマウスではこれが欠損していることを確認した。しかしながら組織切片に対する免疫租織染色及び免疫電顕染色において、十分な染色性を持つ抗体はまだ得られていない。原因として、XIX型コラーゲンの発現量が低いため検出限界を下回ってることが考えられる。現在、より力価の高い抗体をスクリーニングすることと、検出感度を上げる試みを行っている。2)透過型電子顕微鏡による観察生後1年を経過するKOマウスの下部食道括約部を透過型電子顕微鏡で観察したところ、平滑節細胞間の基底膜層に乱れたコラーゲン線維が増生し、平滑筋同士の接着が損なわれていた。この線維化は食道拡張を起こしていないKOマウスにも見られたが健常マウスには見られなかった。さかのぼって出生直後りKOマウスの観察では線維化は起こっておらず、著明を変化はまだ見られなかったがKOマウスでは平滑筋の基底膜層の間隙が健常マウスと比べ若干拡がっている傾向がみられた。

1)Specific antibodies were prepared and immunostained. The N-terminal and C-terminal cDNA fragments of the XIX type cDNA fragment are encoded by GST fusion protein, and the antigen-specific cDNA fragments are encoded by GST fusion protein. This antibody is used to identify the 20 ~ 30-minute tissue defect. Immunohistochemical staining and immunoelectrostaining are used to detect the presence of antibodies in tissue sections. Cause: XIX type: low level: low Now, the high level of antibody in the force field can be detected. 2)A transmission electron microscope was used to observe the growth and development of smooth muscle cells in the basal membrane layer of the lower esophagus. This line of defense is open to the public, and it's open to the public. The gap between the basal membrane and the smooth tendon is normal.

项目成果

吉岡秀克 他: "軟骨に発現するコラーゲン遺伝子の選択的スプライシング"Connective Tissue. Vol.34,No.2. 157-163 (2002)

Hidekatsu Yoshioka 等人：“软骨中表达的胶原蛋白基因的选择性剪接”，《结缔组织》第 34 卷，第 157-163 期（2002 年）。

Matsuo N et al.: "The transcription factor CCAAT-binding factor CBF/NF-Y regulates the proximal promoter activity in the human α1(X1) collagen gene (COL11A1)."J.BIol.Chem.. 278・35. 32763-32770 (2003)

Matsuo N 等人：“转录因子 CCAAT 结合因子 CBF/NF-Y 调节人 α1(X1) 胶原蛋白基因 (COL11A1) 中的近端启动子活性。”J.BIol.Chem.. 278・35。 -32770 (2003)

住吉秀明 他: "XIX型コラーゲンに関する最近の知見"Connective Tissue. Vol.34,No.2. 175-179 (2002)

Hideaki Sumiyoshi 等人：“XIX 型胶原蛋白的最新发现”结缔组织，第 34 卷，第 175-179 号（2002 年）。

Takeo N et al.: "Structure and hetero geneity of the human gene for epiplakin(EPPK1)"J.Invest.Dermatol.. 121・5. 1224-1226 (2003)

Takeo N等人：“人类表皮蛋白基因（EPPK1）的结构和异质性”J.Invest.Dermatol.. 121・5（2003）。