微小管結合蛋白質の1次元拡散〜微小管はシグナル伝達装置として機能し得るか?〜

微管相关蛋白的一维扩散：微管可以作为信号转导装置吗？

• 批准号: 14780505
• 负责人: 井上 裕一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780505/
• 关键词: 微小管; モータータンパク質; 1分子イメージング

微小管の分子機能を新しい観点から検討するため、微小管に沿った1次元拡散運動がモータータンパク質に一般的に見られるか、さらにはモータータンパク質以外でも見られるかについて、1分子蛍光イメージング法を用いて調べた。まず微小管系モータータンパク質として、キネシン変異体とダイニンについて調べた。キネシンはネックリンカーと呼ばれる部位を欠損させると、正常な一方向の1分子運動を行うことができなくなったが、ADPによってアフィニティを下げると両方向性の1次元拡散が見られた。また、ダイニンについては、ウニ精子鞭毛から抽出した外腕ダイニンを用い、微小管結合への新しい機能性プローブとして蛍光ヌクレオチドによって微小管相互作用を調べたが、微小管上での1分子運動は確認されなかった。次に、微小管系以外のモーターにおいて、骨格筋ミオシンはアクチン系モータータンパク質でありながら微小管とも結合することを見出し、多分子の条件下においては1次元拡散することを発見していた。この運動が1分子でも見られるかを、さまざまな条件下で検討するため、ヌクレオチドやイオン強度、pH等の溶液条件を変化せると、微小管へのアフィニテイは変化したが、1分子による1次元運動は観察されなかった。同様に、モーター以外のタンパク質として、MAPs、H-ras、BSAなどについても1次元拡散は観察されなかった。これらの結果から、微小管上を一次元的に長距離に渡って相互作用するのはモータータンパク質のみでかつ、限られた条件下であり、タンパク一般に見られる現象ではないことが示唆された。

Tiny tube の molecular function を new し い 観 point か ら beg す 検 る た め, tiny tubes に along っ た 1 yuan company, bulk movement が モ ー タ ー タ ン パ ク qualitative に に see commonly ら れ る か, さ ら に は モ ー タ ー タ ン パ ク mass outside で も see ら れ る か に つ い て, 1 molecular 蛍 light イ メ ー ジ ン を グ method using い て adjustable べ た. ま ず tiny piping モ ー タ ー タ ン パ ク qualitative と し て, キ ネ シ ン - variant と ダ イ ニ ン に つ い て adjustable べ た. キ ネ シ ン は ネ ッ ク リ ン カ ー と shout ば れ を owe る parts damaged さ せ る と の 1 molecular motion, a normal な direction line を う こ と が で き な く な っ た が, ADP に よ っ て ア フ ィ ニ テ ィ を under げ る と struck directional の 1 yuan company, see scattered が ら れ た. ま た, ダ イ ニ ン に つ い て は, ウ ニ sperm flagella か ら spare し た outside wrist ダ イ ニ ン を い, tiny tubes by へ の new し い functional プ ロ ー ブ と し て 蛍 light ヌ ク レ オ チ ド に よ っ て tiny tube interaction を adjustable べ た が, tiny pipe で の 1 molecular motion は confirm さ れ な か っ た. に, tiny pipe outside の モ ー タ ー に お い て, skeletal muscle ミ オ シ ン は ア ク チ ン department モ ー タ ー タ ン パ ク qualitative で あ り な が ら tiny tube と も combining す る こ と を see し, under the condition of many molecular の に お い て は 1 yuan company, scattered す る こ と を 発 see し て い た. こ の movement が 1 molecular で も see ら れ る か を, さ ま ざ ま な conditions で す 検 please る た め, ヌ ク レ オ チ ド や イ オ ン intensity, pH を の solution conditions, such as the variations change せ る と, tiny tubes へ の ア フ ィ ニ テ イ は variations change し た が, 1 molecular に よ る 1 yuan movement は 観 examine さ れ な か っ た. Outside with others に, モ ー タ ー の タ ン パ ク qualitative と し て, MAPs, H - ras, BSA な ど に つ い て も 1 yuan company, scattered は 観 examine さ れ な か っ た. こ れ ら の results か ら, tiny pipe を a yuan に long-distance に crossing っ て interaction す る の は モ ー タ ー タ ン パ ク qualitative の み で か つ, limit ら れ た conditions で あ り, タ ン パ ク に commonly seen ら れ る phenomenon で は な い こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

田村隆明, 山本雅 編: "分子生物学イラストレイテッド 第2版"羊土社. 380 (2002)

Takaaki Tamura，Masaru Yamamoto（编辑）：“分子生物学图解第 2 版”Yodosha。380（2002 年）

Ch.Zander, J.Enderlein, R.A.Keller (eds.): "Single Molecule Detection Solution"WILEY-VCH. 365 (2002)

Ch.Zander、J.Enderlein、R.A.Keller（编辑）：“单分子检测解决方案”WILEY-VCH。