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昆虫由来の受容体遺伝子を用いた人工受容体の開発と神経回路網研究への応用

利用昆虫受体基因开发人工受体及其在神经网络研究中的应用

基本信息

批准号：
14780582
负责人：
森田光洋
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

オクトパミンは無脊椎動物にみられる神経伝達物質であり、脊椎動物では合成されず受容体も存在しない。ショウジョウバエのオクトパミン受容体はGタンパク質共役型であり、細胞内カルシウム上昇とcAMP産生を引き起こすことが知られている。オクトパミン受容体遺伝子を脊椎動物由来の細胞に導入した場合、遺伝子発現した細胞選択的に細胞応答が引き起こされると予想される。この点に注目し、複雑な神経回路網において特定の細胞が示すカルシウム上昇などがシステム全体に果たす役割を解明する手段の開発を試みた。具体的にはオクトパミン受容体が脊椎動物細胞において引き起こす細胞応答の解析と、細胞種特異的プロモーターを用いた標的細胞におけるオクトパミン受容体の発現と、これにより引き起こされる神経活動の解析を行った。哺乳動物由来であるPC12h細胞、初代培養神経細胞およびアストロサイトにオクトパミン受容体を発現させた場合、PC12h細胞とアストロサイトにおいてオクトパミン刺激に対するカルシウム応答が見られたが、神経細胞は反応を示さなかった。しかし、電気生理学的解析を行ったところ、神経細胞においては脱分極刺激に対するカルシウム上昇の増強と、カリウムチャンネルの抑制が見られることが明らかになった(現在投稿中)。オクトパミン受容体を細胞種特異的に発現させる目的で、神経細胞とアストロサイトにそれぞれ特異的なプロモーターを培養細胞系において確立した(Tsuchiya et al., Brain Res. 2002)。これを用いてオクトパミン受容体を培養神経細胞および海馬由来スライス培養標本において細胞種特異的に発現させ、これを刺激した際の神経活動を検討中である。神経活動を効率的に検討する方法として、スライス培養標本における共焦点レーザー顕微鏡を用いたカルシウムイメージングを確立した(Morita et al., J.Neurosci. 2003)。

Invertebrates, vertebrates, and synthetic receptors exist. The cell cycle is regulated by the intracellular cAMP production, and the cell cycle is regulated by the intracellular cAMP production. The expression of receptor genes in vertebrate derived cells was investigated in vitro. The development of a specific cell in a complex neural network is being tested. The specific receptor for vertebrate cells was analyzed for cell response, cell species-specific receptor for vertebrate cells was analyzed for cell response, and the specific receptor for vertebrate cells was analyzed for cell response. Mammalian origin: PC12h cells, primary cultured neurons, receptors, PC12h cells, neurons, and neurons. The analysis of electrophysiology is carried out in the following ways: the increase in the intensity of the increase in the polarization of the neuron, the increase in the polarization of the neuron, and the inhibition of the polarization of the neuron (currently in submission). The cell species-specific development of the receptor was established for the purpose of establishing a cultured cell line with a neurocyte culture medium (Tsuchiya et al., Brain Res. 2002)。This is the first time that we've been able to study the species-specific development and stimulation of neurons in cultured neurons and hippocampus. Methods for detecting the rate of neural activity in cultured cells were established using confocal microscopy (Morita et al., J.Neurosci. 2003)。