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Nurr1相互作用分子から迫るカテコールアミン合成酵素発現機構の解明

从 Nurr1 相互作用分子中阐明儿茶酚胺合酶的表达机制

基本信息

批准号：
14780586
负责人：
鈴木崇弘
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology (2003)Fujita Health University (2002)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780586/
关键词：
Tyrosine hydroxylase Nurr1 ATF-2 NGF MEK Tyrosine Hydroxylase

项目摘要

転写因子ATF-2は、Nurr1遺伝子発現調節領域に存在するcAMP応答配列(CRE)に結合することが報告されており、かつ神経の発達に重要であることが示唆されている。前年度の成果として、ATF-2は、チロシン水酸化酵素(TH)の遺伝子発現調節領域に存在するCREに作用して、THの発現誘導に関わることを示した。神経発達期に重要である神経成長因子(NGF)は、Nurr1の発現誘導とATF-2のリン酸化上昇の両方を引き起こすことから、本年度はNGFによるTHの発現誘導機構を解析した。PC12D細胞においてNGF刺激により誘導されるTH mRNA量の増大は、MEK阻害剤であるU0126で前処理することで抑制されたが、p38 MAPK、PI3K、およびPKAの阻害剤では抑制されなかった。また、ルシフェラーゼレポーターアッセイを行った結果、U0126は、NGFにより誘導されるTHプロモーター活性の上昇を抑制し、その濃度依存性はERK1/2リン酸化誘導の抑制と一致していた。野生型Rasおよび活性化型MEK1の一過性過剰発現によりTHプロモーター活性は上昇し、不活性化型Rasの過剰発現によりNGF刺激によるTHプロモーター活性の誘導は抑制された。さらに、NGFはTHプロモーターに存在するAP-1応答配列とcAMP応答配列(CRE)の両方に対してRas-MEK依存的な活性化を行っていた。以上の結果から、NGFによるTH発現誘導にはRas-MEK経路の活性化が必要であることが示され、この成果を論文として発表した。Ras-MEK経路は、ATF-2の転写活性を制御することが示唆されており、Ras-MEK経路によるATF-2およびNurr1の機能制御がTHの発現誘導に作用する可能性が考えられた。

Factor ATF-2 and Nurr1 are important for the regulation of cAMP response sequence (CRE) binding in gene expression. The results of the previous year showed that ATF-2 had a role in CRE and TH induction in the regulation of TH gene expression. This year, NGF was analyzed as an important factor in the development of the nervous system. NGF was used to induce the expression of Nurr1 and ATF-2. PC12D cells were stimulated by NGF and inhibited by MEK inhibitor U0126, p38 MAPK, PI3K and PKA. U0126 inhibited the increase of THR activity induced by NGF, and the concentration-dependent inhibition of ERK1/2 acidification induced by NGF was consistent. The transient over-expression of wild-type Ras and activated MEK1 resulted in an increase in TH macrophage activity, and the over-expression of inactivated Ras resulted in an inhibition of the induction of TH macrophage activity by NGF stimulation. In addition, NGF is associated with AP-1, cAMP, and CRE, which is associated with Ras-MEK-dependent activation. The above results show that the activation of the Ras-MEK pathway is necessary. The possibility of the functional control of ATF-2 and Nurr1 in the Ras-MEK circuit for TH induction was examined.