ゼブラフィッシュにおける性決定・分化の分子メカニズム

斑马鱼性别决定和分化的分子机制

• 批准号: 03F00107
• 负责人: 長濱 嘉孝
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03F00107/
• 关键词: ゼブラフィッシュ; 性分化; セルトリ細胞株; 遺伝子導入; DMRT1; 精巣; 生殖腺の性転換; 細胞培養

脊椎動物における生殖腺の性分化は、その後に起こる脳の性分化をはじめとする諸々の性現象の引金となる重要な発生過程である。本研究では、発生研究の脊椎動物モデルとして近年注目されているゼブラフィッシュの生殖腺の性分化機構を細胞培養系を用いて明らかにすることを目的とする。特に、メダカで脊椎動物において二番目に同定された性決定遺伝子DMYにより精巣の体細胞セルトリ細胞で発現を促進、抑制される遺伝子群を、この遺伝子がまったく存在しないゼブラフィッシュのセルトリ細胞に強制発現させることにより同定することを目的とする。平成15年度は、先ず生殖研究部門にゼブラフィッシュの飼育システムを立ち上げるとともにゼブラフィッシュのセルトリ細胞株の培養系をセットアップした。さらに現在、このセルトリ細胞株を用いて以下の実験を行っている。本研究で確立したセルトリ細胞株はセルトリ細胞に特異的に発現すると考えられているSox9とWT1の遺伝子を発現しているが、生殖細胞に特異的であるVasa遺伝子は発現していない。この細胞にメダカの性決定遺伝子であるDMY(GFP標識)を強制的に遺伝子導入することによりメダカDMYをstableに発現するセルトリ細胞株を樹立した。DMYを強制発現させたゼブラフィッシュのセルトリ細胞で発現を促進、抑制される遺伝子を同定する目的で、(DMY導入細胞-コントロール)と(コントロール-DMY導入細胞)との両方のサブトラクションを行った。現在、双方のサブトラクションライブラリーに含まれる遺伝子を解析している。一方、いろいろな長さのDMY(GFP連結)をセルトリ細胞に遺伝子導入することにより、DMYにはNLSが存在し、この配列がDMYの核局在に不可欠であることを明らかにした。今後、精巣のセルトリ細胞に特異的に発現するDMRT1遺伝子についても同様な実験を行う予定である。

Sexual differentiation of the gonads of vertebrates, sexual differentiation of the gonads of vertebrates, and sexual differentiation of the gonads of vertebrates. This research focuses on the research on vertebrate animals, which has attracted attention in recent years. The gonad sexual differentiation mechanism and cell culture system are used for the purpose of the research. Special に, メダカでvertebrate において二片目に同定されたsexuality-determining inheritance 伝子DMY により sperms のsomatic cell セルトリcell で発appears to promote and inhibit されるgenetic伝子群を、この缝子がまったくexistingしないゼブラフィッシュのセThe させることにより Same as the determined することをpurpose とする. In 2009, the Reproductive Research Department of the Department of Reproductive Medicine was established.げるとともにゼブラフィッシュのセルトリ cell strain のculture system をセットアップした. The current use of さらに, the このセルトリ cell line, and the いて following の実験を行っている. In this study, we have established the specific に発成すると考えられているSox9 of the したセルトリ cell strain and はセルトリ cellsとWT1 の缝子を発appears しているが, germ cell に-specific であるVasa 缝子は発appears していない.このCell にメダカのSex-determining legacy であるDMY (GFP mark) を mandatory に legacy 伝子 import The DMY stable cell line is now established. DMY is a forced 発appear させたゼブラフィッシュのセルトリcell で発appear を promotion and inhibition される伝子を同定するpurposeで, (DMY introduced cells-コントロール)と(コントロール-DMY introduced cells)との両方のサブトラクションを行った. Now, the analysis of the two sides' original analysis is done. One party, long-lasting DMY (GFP link) をセルトリ cell に伝子 introduced することにより, DMY's existence and NLS's existence, DMY's nuclear bureau is indispensable. From now on, the specific DNA of the spermatozoa and DMRT1 will be determined in the same way.