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新規のチトクロームP450c17(ステロイド代謝酵素)の機能解析

新型细胞色素P450c17（类固醇代谢酶）的功能分析

基本信息

批准号：
08F08088
负责人：
長濱嘉孝
金额：
$ 1.02万
依托单位：
National Institute for Basic Biology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08F08088/
关键词：
Cytochrome P450c17 17・-hydroxylase 17,20 lyase Steroidogenesis Meiosis Teleost fish Gonad Sex differentiation 17α-hydronxylase

项目摘要

申請者はこれまで脊椎動物、特に哺乳類を対象とする研究者が長年競って研究してきたチトクロームP450c17が有する2つの酵素活性の制御機構について、魚類では17α-水酸化酵素活性とライエース活性とが2つの異なる酵素蛋白質によって調節されていることをはじめて明らかにした(P450c17-I,とP450c17-I-II)。本年度は、P450c17-IIの減数分裂及びコーチゾル合成に果す役割を明らかにする目的で、この遺伝子の機能欠失実験(RNAi法による遺伝子ノックダウン)を行った。P450c17-IIをノックダウンした個体は孵化後に死亡する個体が増加したが、飼育水中にコーチゾルを添加すると生存率が高まった。ノックダウン個体の頭腎組織のステロイド産生細胞は異常を示した。これらの結果から、P450c17-IIは頭腎におけるコーチゾルの合成に重要な役割を果たすことが強く示唆された。一方、P450cl7-II遺伝子のノックアウト後にも生存したXX個体では、しばしば雄への性転換が認められ(鰭などの外部形態も典型的な雄型を示した)、このような性転換雄魚は正常なXX雌との交配により正常な雌稚魚が得られた。先行実験の結果とあわせ、P450c17-IIは17α,20β-DPの合成促進と作用を介して、XX個体の生殖腺における正常な発生と発達に何らかの役割(例えば、雌の生殖細胞に特徴的な減数分裂の誘起)を果たしている可能性が示唆された。本研究ではまた、卵巣分化に重要な役割を果たす他の因子の検討も行ったが、R-spondinl(Rspol)についてきわめて興味ある結果が得られた。XX受精卵でRspo1遺伝子をノックダウンすると雄への性転換、さらにXY受精卵にRspo1遺伝子を微小注して過剰発現させると雌への性転換が起こった。また、XX胚及びXY胚の生殖腺の正常発生を詳しく観察した結果、RspolはメダカのXX胚の性分化期の生殖細胞に特異的に発現することがわかった。これらの結果を総合すると、R-spondinl(Rspol)はメダカにおいて卵巣の分化(卵巣の形成)に不可欠であることがはじめて明らかになった。

The applicant is a researcher of vertebrates, special mammals and elephants and has been engaged in research for many years.チトクロームP450c17が有する2つのenzyme activity control mechanism について、fish では17 α-Water acidifying enzyme activity and enzyme activity and enzyme protein and regulationることをはじめて明らかにした(P450c17-I,とP450c17-I-II). This year's meiosis and synthesis of P450c17-II are doneるpurposeで、この箼伝子の functional insufficiency実験(RNAi methodによる伝子ノックダウン)を行った. P450c17-II をノックダウンした individual は dies after hatching する individual The survival rate of the water added to the breeding water is high and the survival rate is high. Abnormalities in the cells produced in the head kidney tissue of an individual's head and kidneys are indicated.これらのRESULTS から、P450c17-II は头 Kidney におけるコーチゾルの综合にimportantなservice cut をfruit たすことが强く Show唆された. One side, P450cl7-II legacy 伝子のノックアウト后にもsurvivalしたXX individualでは、しばしば男への性転changeが见められ(finなThe external form of the どの is the typical な male type (をshows the した), and the このようなsexual 転changes to the male fish は the normal XX female との mating によりnormal なfemale juvenile fish られた. The result of the first step is to promote the synthesis of P450c17-II and 17α, 20β-DP, and the gonad gland of XX individuals is There is no possibility of normal birth and development of genital mutilation. This study focuses on the importance of egg differentiation and egg differentiation, and the importance of other factors and factors, such as R -spondinl (Rspol) についてきわめて心丝あるRESULTS が got られた. XX fertilized egg でRspo1 left 伝子をノックダウンすると男への性転 Change, さらにXY Received The sperm and egg are にRspo1, and the remaining sperm is a tiny note. The results of normal gonad development of XX embryos, XX embryos and XY embryos, Rspo The germ cells of the XX embryo in the sexual differentiation stage are specific and specific. R-spondinl(Rspol)はメダカにおThe differentiation of the eggs (the formation of the eggs) is indispensable.