担子菌ウシグソヒトヨタケの子実体形成に関する突然変異株の分子遺伝学的解析

担子菌子实体形成相关突变株的分子遗传学分析

• 批准号: 03J02545
• 负责人: 寺島 和寿
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J02545/
• 关键词: 担子菌; きのこ; ウシグソヒトヨタケ; 子実体形成; 光形態形成; 青色光受容体; LOVドメイン; PASドメイン

1 子実体の光形態形成に関わる遺伝子dst1の遺伝子破壊の試みdst1の5'非コード領域(約3kb)-ハイグロマイシンB耐性遺伝子(hph)-dst1の3'非コード領域(約3kb)を含むプラスミドを用い、野生株(#326)を形質転換し、相同組み換えを利用したdst1の遺伝子破壊を試みた。形質転換により得られたハイグロマイシン耐性株466株のdst1をコロニーPCRにより調べた結果、dst1遺伝子破壊株は見つからなかった。しかしながら、これらのハイグロマイシン耐性株の中から、光形態形成異常を示す株3株(dst#2,dst#53,dst#106)が見つかった。また、dst#2の変異遺伝子は相補性検定から、dst1遺伝子であることが示唆されたが、この変異株のdst1遺伝子の塩基配列を決定したところ変異が発見できなかった。2 子実体の光形態形成に関わる遺伝子dst2の分子遺伝学解析dst2が座乗していると思われる第五染色体の染色体コスミドライブラリーからdst2変異を相補するコスミドクローンの検索を行った。384個のコスミドクローンを用いてdst2変異株を形質転換した結果、Plate5のF8クローンによりdst2変異が部分的に相補されることがわかった。3 子実体形成に関する新規の突然変異株の作出変異遺伝子がタギングされた突然変異株の作出を効率よく行うために、ウシグソヒトヨタケでのアグロバクテリウムを利用した形質転換を試みた。ヒトヨタケの薬剤耐性マーカーとしてハイグロマイシン耐性遺伝子を持つプラスミドを構築し、アグロバクテリウムのC58C1株を用いて実験を行った。その結果、平均0.7株/1プレートのハイグロマイシン耐性の形質転換株が得られた。しかしながら、PEG法による形質転換効率(10〜20株/1プレート)に比べて非常に形質転換効率が低く、アグロバクテリウムを利用した形質転換法は、ウシグソヒトヨタケの子実体形成に関する新規突然変異株の作出には適さないことがわかった。

1. In vivo photomorphogenesis, the gene of dst 1 was detected in the 5 'non-female domain of dst 1 (about 3 kb)-in the 3' non-female domain of dst 1 (about 3 kb)-in the resistant gene (hph)-in the wild strain (#326). 466 resistant strains were identified by DNA sequencing and PCR. Three resistant plants (dst#2, dst#53, dst#106) showed abnormal photomorphology. Dst, dst #2 and dst 1 are complementary to each other, and the base alignment of dst 1 and dst 2 is determined. The molecular genetic analysis of chromosome dst2 is related to the photomorphogenesis of chromosome 2. The chromosome 5 of chromosome dst2 is complementary to the chromosome 5 of chromosome 2. 384 different plants were used in the study, and the results of qualitative changes were compared with those of Plate 5 in the study. 3. In the case of the formation of a new plant, it is necessary to make a change in the quality of the plant. C58C1 strain is used to construct and control the resistance of the resistant gene. The results showed that 0.7 plants/1 plant were obtained on average. The PEG method has a lower rate of physical transformation (10~20 plants/1 plant) than the traditional method. The PEG method is used to improve the quality of the plant.