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造血幹細胞の運命決定に関与する因子の同定及び機能解析

造血干细胞命运决定因素的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
03J11787
负责人：
平澤竜太郎
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The Graduate University for Advanced Studies (2004-2005)The University of Tokyo (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

DNAメチル化が細胞の分化・未分化の決定に大きく関与している事は良く知られており、細胞の初期化や幹細胞の維持にもDNAメチル化によるエピジェネティックな制御が重要であることが示唆されている。マウス初期胚及び生殖細胞におけるゲノムDNAのメチル化は・脱メチル化及び維持メチル化の制御機構は、幹細胞における未分化性の維持と脱分化の解析において良いモデルになると考え、造血幹細胞を初めとした様々な体性幹細胞への応用への応用も視野に入れ、マウス初期胚におけるDNAメチル化酵素(Dnmt)の解析を行った。マウス初期胚ではゲノムワイドな脱メチル化が起こる一方で、ゲノムインプリンティングのメチル化は維持される。このメチル化の消去と維持が同時に行われる過程において、Dnmtがどのように関与しているのかは明らかになっていない。そこで、Dnmt1、Dnmt3a及びDnmt3bのコンディショナルノックアウト(cKO)マウスを用いて、生殖細胞特異的にDNAメチル化酵素を欠損させ、マウス初期胚におけるゲノムインプリンティングの維持への関与を調べたところ、Dnmt3a/Dnmt3bダブルKO胚においてもインプリントのメチル化は維持されていた。このことからマウス初期胚においてもメチル化の維持にはDnmt1が強く関与している事が示唆され、現在Dnmt1のcKOマウスを用いて解析を行っている。また、マウス初期胚における各Dnmtの発現及び細胞内局在を調べるために、初期胚を用いた免疫染色の実験系を立ち上げた。卵細胞特異的なcKOマウスを用いて発現の制御を解析した結果、各Dnmtは異なる発現パターンを示し、発生初期過程においてDnmtの発現制御がダイナミックに変化していることが明らかとなった。

DNA differentiation and differentiation of stem cells are important for understanding and maintaining DNA differentiation and differentiation. The analysis of DNA degradation enzyme (Dnmt) in embryonic and germ cells is carried out in the field of vision for embryonic and germ cells. In the early stages of the game, the game was played out in the first place, and the game was maintained in the second place. The process of transformation and elimination is simultaneous, and Dnmt is simultaneous. Dnmt1, Dnmt3a and Dnmt3b are used in the development of germ cell-specific DNA degradation enzymes, and Dnmt3a/Dnmt3b are used in the development of germ cell-specific DNA degradation enzymes. In the initial stage of the game, the game is maintained in the Dnmt1 game. Now, the game is analyzed in the Dnmt1 game. The development of Dnmt and the development of intracellular Dnmt in the early embryo stage were investigated. The analysis results of egg cell-specific gene expression and control showed that the gene expression of each Dnmt was different, and the gene expression and control of each Dnmt were different in the early stage of development.