大腸癌発症機構の解明

阐明结直肠癌发生的机制

基本信息

批准号：
03J61516
负责人：
関谷高史
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J61516/
关键词：
転写制御 TGF-β BAMBI SMAD Wnt 大腸癌 β-Catenin

项目摘要

本年度も、昨年度に引き続きTGF-βシグナル伝達経路の抑制因子BAMBIの解析を行った。昨年度までの研究でBAMBI遺伝子の発現がWntシグナル伝達経路により正の制御を受けることを明らかにしたが、本年度は新たに、BAMBI遺伝子がTGF-βシグナル伝達経路によっても正の発現制御を受けることを見出した。まず、TGF-β刺激に対するBAMBI遺伝子の誘導は刺激後1時間で既に確認され、BAMBIタンパク質の発現もそれに引き続いて上昇することを確認した。さらに、この誘導はタンパク質合成阻害剤シクロヘキシミドによる影響を受けないことから、他のタンパク分子の発現誘導による二次的な現象ではないことも明らかとした。次に、ルシフェラーゼレポーターアッセイとゲルシフトアッセイにより、この制御はTGF-βシグナル経路の伝達因子であるSMAD転写因子がBAMBI遺伝子プロモーター上流、255bpから176bpの領域に結合することによる直接の制御であることを明らかにした。本研究成果は、Biochem Biophys Res Commun.誌にて発表した。次に、昨年度の研究によりBAMBIが87番目のアスパラギン残基に糖鎖修飾を受けることを見出したが、本年度はその糖鎖修飾の生理的意義を探究した。まず、87番目のアスパラギン残基をグルタミン残基で置換し、糖鎖修飾を受けなくなった変異体を作成し、細胞内局在を解析したが、野生型と比較し著明な差異は確認されなかった。次に、ルシフェラーゼレポーターアッセイによりこの変異体のTGF-βシグナル伝達抑制能を解析したが、野生型と同様の活性を維持していることが確認された。以上の結果より、BAMBIの糖鎖修飾は生理的に重要な機能を有さないであろうと推測するに至った。

今年，我们分析了TGF-β信号通路的抑制剂Bambi，就像去年一样。直到去年的一项研究表明，BAMBI基因表达受WNT信号通路的正调控，但是今年，我们新发现，BAMBI基因也受TGF-β信号传导途径的积极调节。首先，已经证实，刺激后1小时已经确认了BAMBI基因引起的TGF-β刺激，并且随后增加了BAMBI蛋白的表达。此外，揭示了这种诱导不受蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺的影响，因此，由于其他蛋白质分子的表达诱导，这不是次要现象。接下来，荧光素酶报告基因测定法和凝胶转移测定法表明，该调节是通过结合TGF-β信号途径Smad转录因子与BAMBI基因启动子上游区域与255-176 BP区域的结合。这项研究的结果发表在杂志Biochem Biophys Res Commun中。接下来，去年的研究发现，小鹿斑比在第87天际上残基进行了糖基化修饰，今年我们探索了该糖基化修饰的生理意义。首先，在位置87处的天冬酰胺残基被用谷氨酰胺残基取代，以产生一种突变体，该突变体不再进行糖基化修饰，并分析了亚细胞定位，但与野生型相比，没有明显的差异。接下来，通过荧光素酶报告基因测定法分析了抑制TGF-β信号传导的能力，并确认它具有与野生型相似的活性。从以上结果来看，据估计，小鹿斑比的糖基化修饰不会具有生理上重要的功能。