Kristallisation und Strukturaufklärung eines ABC-Typ Maltosetransporters durch Röntgenkristallographie

X 射线晶体学对 ABC 型麦芽糖转运蛋白的结晶和结构解析

• 批准号: 5337238
• 负责人: Professor Dr. Kay Diederichs
• 金额: --
• 依托单位: Fachbereich Biologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2003-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5337238?language=en
• 关键词: Kristallisation; und; Strukturaufkl; rung; eines

Das vorgeschlagene Projekt ist eine Fortsetzung und Ausweitung von Arbeiten, die seit Mai 1997 als Teil eines DFG-Forschergruppenprojekts in Zusammenarbeit mit Professor Boos, Abt. Mikrobiologie, Universität Konstanz, durchgeführt wurden. Das Fern- und Hauptziel war und ist, die bislang unbekannte Struktur eines ABC Transporters aufzuklären. Nachdem die Kristallisation der ATPase-Untereinheit und des gesamten Maltosetransporters aus E.coli mißlang, wurde ein homologer Maltosetransporter aus einem thermophilen Archaeon in Angriff genommen, von dem wir uns durch sein 85 C liegendes Aktivitätsmaximum eine höhere Stabilität erhoffen. Die erstmalige Expression eines Membranproteins und seiner Untereinheiten aus einem extrem thermophilen Archaeon (Thermococcus litoralis) war eine Pionierleistung der AG Boos. Dadurch konnten in unserer AG ausführliche Kristallisationsversuche an den extrem stabilen Proteinen, dem periplasmatischen Bindeprotein T.1.MalE (alias TMBP), der ATPase-Untereinheit (T.1.MalK) und erste Kristallisationsversuche an dem ganzen Transporter T.1.MalFGK² durchgeführt werden. In den vergangenen zwei Jahren gelang uns bereits die Kristallisation und Strukturaufklärung zweier Teilstrukturen des Maltosetransporters: eines Trehalosekomplexes des Bindeproteins MalE, und des Dimers der ATPase-Untereinheit T.1.MalK mit bebundenem Pyrophosphat bzw. ADP. In der Zukunft sollen intensiv Kristallisationsversuche und Strukturaufklärungen am ganzen Transporter und an Komplexen der ATPase-Untereinheit T.1.MalK mit verschiedenen Liganden durchgeführt werden.

该项目是一个对劳动力的支持和鼓励，1997年5月起，DFG研究小组在苏黎世与Boos教授、Abt. Konstanz大学微生物学系，durchgeführt wurden。Fern-和Hauptestern是一种ABC运输机的结构。通过对大肠杆菌中的ATP酶解和麦芽糖转运蛋白的结晶，在Angriff基因组中发现了一种来自嗜热菌的同源麦芽糖转运蛋白，我们通过85 C的酶解获得了最大的活性，并使其稳定性提高。极端嗜热菌（Thermococcus litoralis）的膜蛋白和非膜蛋白的初步表达是AG Boos的一种载体。在我们的股份公司中，通过韦尔登转运蛋白T.1.MalFGK的转运，可获得具有极高稳定性的蛋白质、胞浆周结合蛋白T.1.MalE（alias TMBP）、ATP酶解蛋白（T.1.MalK）和首次的晶体结合。本文研究了两种麦芽糖转运蛋白的结晶和结构：结合蛋白MalE的海藻糖复合物和ATP酶-非结合蛋白T.1.MalK的二聚体。ADP在这种情况下，需要对整个转运体和ATP酶-非线性T. 1. MalK复合物进行强化结晶和结构分析，并通过韦尔登形成稳定的配体。