膜貫通型蛋白質の合成を目的とする新規なペプチドライゲーション法の開発

开发用于合成跨膜蛋白的新型肽连接方法

• 批准号: 15750143
• 负责人: 川上 徹
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15750143/
• 关键词: ペプチド合成; プペプチドチオエステル; ケミカルライゲーション; 拡張型ペプチドライゲーション; ライゲーション補助基; 膜蛋白質; 光反応; N-Sアシル転移; ペプチドチオエステル

近年,ペプチドセグメントを縮合することによる種々の長鎖ペプチド合成法が報告されている.本研究では取扱いの難しい難溶性膜貫通型蛋白質の合成を目的とする新規なペプチドライゲーション法の開発を目的としている.このような膜蛋白質やまた長鎖ペプチドを合成する場合,縮合部位の選択が重要な問題となる.そこで縮合部位の選択に柔軟性を持たせるため,性質の異なるチオエステル法と拡張型ケミカル(ペプチド)ライゲーション(ネイティブケミカルライゲーション)法を組み合わせて長鎖ペプチドを合成する方法を開発した.アミノ末端に光除去性ライゲーショシ補助基を有するペプチドチオエステルのアミノ末端(およびチオール基)をチアゾリジンとして保護し,チオエステル法によりペプチドセグメントと縮合したのち,チアゾリジンの保護をはずした.拡張型ケミカルライゲーション法により,さらに別のペプチドチオエステルと縮合することによって長鎖ペプチドを合成することに成功した.また,N-Sアシル基転移反応を利用するペプチドチオエステルの新しい合成法を開発した.我々が開発したライゲーション補助基はペプチド鎖中において,酸処理により一部がN-Sアシル基転移反応(ペプチド結合からチオエステル結合)を起こすことが判明した.この現象を利用してペプチドチオエステルを合成することに成功した.今回は,固相担体上でFmoc法によりペプチド鎖の伸長を行い,酸処理ののちチオール交換反応によってペプチドチオエステルを取り出した.Fmoc法によるペプチドチオエステル合成にはさまざまな制約があるが,今回の方法では,直接チオエステルを合成した際に見られるラセミ化をほとんど伴わないことがわかった.これによりFmoc法によるペプチドチオエステルの合成法がより簡便になるものと期待される.

In recent years, ペ プ チ ド セ グ メ ン ト を condensation す る こ と に よ る kind 々 の long locks ペ プ チ ド synthesis が report さ れ て い る. This study で は take Cha い の difficult し い difficult soluble の type transmembrane protein synthesis を purpose と す る new rules な ペ プ チ ド ラ イ ゲ ー シ ョ ン method の open 発 を purpose と し て い る. こ の よ う な membrane protein や ま た long locks ペ プ チ ド を synthetic す る occasions, condensation parts の sentaku が な important question と な る. そ こ で condensation parts の sentaku に softness を hold た せ る た め, nature の different な る チ オ エ ス テ ル method と type company, zhang ケ ミ カ ル (ペ プ チ ド) ラ イ ゲ ー シ ョ ン (ネ イ テ ィ ブ ケ ミ カ ル ラ イ ゲ ー シ ョ ン) diagram を group み わ せ て long locks ペ プ チ ド を synthetic す る method を open 発 し た. ア ミ ノ に light at the end to remove sex ラ イ ゲ ー シ ョ シ す of subsidies base を る ペ プ チ ド チ オ エ ス テ ル の ア ミ ノ End (お よ び チ オ ー ル) を チ ア ゾ リ ジ ン と し し て protection, チ オ エ ス テ ル method に よ り ペ プ チ ド セ グ メ ン ト と condensation し た の ち, チ ア ゾ リ ジ ン の protection を は ず し た. Type company, zhang ケ ミ カ ル ラ イ ゲ ー シ ョ ン method に よ り, さ ら に don't の ペ プ チ ド チ オ エ ス テ ル と condensation す る こ と に よ っ て long locks ペ プ チ ド を synthetic す る こ と に successful し た. ま た, navier-stokes ア シ ル base planning to move the 応 を using す る ペ プ チ ド チ オ エ ス テ ル の new し い synthesis を open 発 し た. I 々 が open 発 し た ラ イ ゲ ー シ ョ ン subsidies base は ペ プ チ ド lock in に お い て, acid 処 Richard に よ り a が navier-stokes ア シ ル base planning to move the 応 (ペ プ チ ド combining か ら チ オ エ ス テ ル) を up こ す こ と が.at し た. こ の phenomenon を using し て ペ プ チ ド チ オ エ ス テ ル を synthetic す る こ と に successful し た. Today back to は, solid supporter on で Fmoc method に よ り ペ プ チ ド lock の elongation line を い, acid 処 Richard の の ち チ オ ー ル exchange the 応 に よ っ て ペ プ チ ド チ オ エ ス テ ル を take り out し た. Fmoc method に よ る ペ プ チ ド チ オ エ ス テ ル synthetic に は さ ま ざ ま な restrict が あ る が, today back to の way で は, direct チ オ エ ス テ ル を synthetic し た Interstate に see ら れ る ラ セ ミ change を ほ と ん ど with わ な い こ と が わ か っ た. こ れ に よ り Fmoc method に よ る ペ プ チ ド チ オ エ ス テ ル の synthesis が よ り simple に な る も の と expect さ れ る.

项目成果

Chemical Ligation Using a Photoremovable Auxiliary

使用光可去除辅助剂进行化学连接

• 发表时间: 2005
• 期刊: Peptide Science 2004 (印刷中)
• 作者: T.Kawakami et al.

T.Kawakami et al.: "Peptide ligation using a photoremovable auxiliary"Peptide Science 2003. (印刷中). (2004)

T. Kawakami 等人：“使用光可去除辅助剂进行肽连接”Peptide Science 2003。（出版中）。

Preparation of Peptide Thioester by the Fmoc-Solid Phase Method via an On-Resin N-S Acyl Shift

Fmoc-固相法通过树脂上 N-S 酰基转移制备肽硫酯

• 发表时间: 2005
• 期刊: Peptide Science 2004 (印刷中)
• 作者: T.Kawakami et al.;M.Sumida et al.
• 通讯作者: M.Sumida et al.

Extended chemical ligation for polypeptide synthesis by using a photoremovable auxiliary

使用光可去除辅助剂进行多肽合成的扩展化学连接

• 发表时间: 2005
• 期刊: Peptide 2004 (印刷中)
• 作者: T.Kawakami et al.;M.Sumida et al.;T.Kawakami et al.
• 通讯作者: T.Kawakami et al.

T.Kawakami et al.: "A photoremovable ligation auxiliary for use in polypeptide synthesis"Ttrahedron Letters. 44・32. 6059-6061 (2003)

T. Kawakami 等：“用于多肽合成的光可去除连接辅助剂”Ttrahedron Letters 44·32 (2003)。