発現蛋白質を合成ブロックとして用いる高純度長鎖ペプチド合成法の開発

开发以表达蛋白为合成模块的高纯度长链肽合成方法

• 批准号: 12780440
• 负责人: 川上 徹
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780440/
• 关键词: ペプチド合成; リン酸化ペプチド; ペプチドチオエステル; Max蛋白質; 安定同位体標識; ペプチド結合形成

化学的方法と生物学的方法を融合する新規な高純度長鎖ペプチドの合成法の開発を目的として研究を行った.本研究では,NMRを用いた構造解析を念頭におき,部分的に安定同位体標識した蛋白質の合成を行った.1.部分保護C-端ペプチド合成ブロックの合成法の開発申請者らが開発した長鎖ペプチド合成法,チオエステル法,を適用するために,発現蛋白質をカルボキシ(C)端相当する合成ブロックへ誘導する方法を開発した.これにより,遺伝子組換法により大腸菌を用いて調製したMax蛋白質の部分ペプチド,Max(22-110)から,部分保護ペプチドセグメント,[Lys(Boc)^<24,34,40,57,66,77,89,104>]-Max(23-110)(1)を合成した.2.Max蛋白質,リン酸化部分ペプチド(1-110)の合成リン酸化ペプチドチオエステルセグメント,Boc-[Ser(PO_3H_2)^<2,11>]-Max(1-22)-SCH_2CH_2CO-Leu-OH(2)はBoC法により合成した.これらの合成ブロック1と2を銀塩存在下で縮合し,保護基を除去し,[Ser(PO_3H_2)^<2,11>]-Max(1-110)を合成した.さらに,安定同位体で均一に標識した合成ブロック1を調製し,非標識リン酸化ペプチドチオエステル2との縮合により,部分的に標識したリン酸ペプチドを合成した.3.保護基を用いない新規な縮合法による長鎖ペプチドの合成法の開発チオエステル法においては縮合時に保護基を必要とし,有機溶媒中で反応を行う.この問題を回避するために,より温和な条件で縮合反応を行う方法を開発した.C端側合成ブロックのN端に縮合補助基を用い,それを発現蛋白質に応用するために,遊離のペプチドからその合成ブロックを調製する方法を開発した.

Chemical methods と biology を fusion す る new rules な high-purity long locks ペ プ チ ド の synthesis の open 発 を purpose と し を line っ て research た. This study で は, NMR を い た structure thought を に お き, part に stable isotopic body logo し の た protein synthesis を line っ た. 1. Part C - tip ペ プ チ ド synthetic ブ ロ ッ ク の synthesis の open 発 applicants ら が open 発 し た long locks ペ プ チ ド synthesis, チ オ エ ス テ ル method, を applicable す る た め に, 発 now protein を カ ル ボ キ シ (C) end quite す る synthetic ブ ロ ッ ク へ induced す る method を open 発 し た. こ れ に よ り, heritage 伝 subgroups in law に よ り coliform を with い て Modulation し た Max protein の part ペ プ チ ド, Max (22-110) か ら, some protection ペ プ チ ド セ グ メ ン ト, [Lys (Boc) ^ 24,34,40,57,66,77,89,104 < >] - Max (23-110) (1) を synthetic し た. 2. Max protein, リ ン ペ acidification part プ チ ド (1-110) の synthetic リ ン acidification ペ プ チ ド チ オ エ ス テ ル セ グ メ ン ト, bok - [Ser (PO_3H_2) ^ < 2 > 11] - Max (1-22) - SCH_2CH_2CO Leu - OH (2) は bok method に よ り synthetic し た. こ れ ら の synthetic ブ ロ ッ ク 1 と 2 を silver salt deposit Next で condensation し, protect the base を remove し, [Ser (PO_3H_2) ^ < 2 > 11] - Max (1-110) を synthetic し た. さ ら に, stable isotopic body で に uniform identity し た synthetic ブ ロ ッ ク 1 を し modulation, the logo リ ン acidification ペ プ チ ド チ オ エ ス テ ル 2 と の condensation に よ り, part of the に logo し た リ ペ ン acid Youdaoplaceholder0 synthesize た.3. With base を い な い new rules な condensation method に よ る long locks ペ プ チ ド の synthesis の open 発 チ オ エ ス テ ル method に お い て は condensation に protect base を necessary と し, organic solvent で anti 応 を う. こ の problem を avoid す る た め に, よ り benign conditions な で condensation anti 応 を line う method を open 発 し た. C end side synthetic ブ ロ ッ ク の n-terminal に condensation Base を い, そ れ を 発 now protein に 応 with す る た め に, free の ペ プ チ ド か ら そ の synthetic ブ ロ ッ ク を modulation す る method を open 発 し た.

项目成果

Toru Kawakami et al.: "Synthesis of a Phosphorylated Polypeptide Using an Expressed Peptide as a Building Block"Peptide Science 2000. (印刷中). (2001)

Toru Kawakami 等人：“使用表达的肽作为构建模块合成磷酸化多肽”Peptide Science 2000。（出版中）。

Toru Kawakami et al.: "Polypeptide Synthesis Using an Expressed Peptide as a Building Block via the Thioester Method"Tetrahedron Letters. 41,15. 2625-2628 (2000)

Toru Kawakami 等人：“通过硫酯法使用表达的肽作为构建模块进行多肽合成”四面体快报。

Toru Kawakami et al.: "Synthesis of a Phosphorylated Polypeptide Using an Expressed Peptide as a Building Block"Peptide Science 2000. 21-22 (2001)

Toru Kawakami 等：“使用表达的肽作为构建模块合成磷酸化多肽”Peptide Science 2000. 21-22 (2001)

Saburo Aimoto et al.: "The Use of a Free Peptide for Preparation of a C-Terminal Building Block for Polypeptide Synthesis in Combination with a Peptide Thioester"Peptides : The Wave of the Future. (印刷中).

Saburo Aimoto 等人：“使用游离肽与肽硫酯组合制备用于多肽合成的 C 末端结构单元”肽：未来的浪潮（正在出版）。

Toru Kawakami et al.: "Peptide Bond Formation Mediated by 4, 5-Dimethoxy-2-mercaptobenzylamine after Periodate Oxidation of the N-terminal Serine Residue"Organic Letters. 3,9. 1403-1405 (2001)

Toru Kawakami 等人：“N-末端丝氨酸残基高碘酸盐氧化后由 4, 5-二甲氧基-2-巯基苄胺介导的肽键形成”有机快报。