T2-MITE転移因子の大量増幅・転移機構に関する研究

T2-MITE转座元件的质量扩增及易位机制研究

• 批准号: 15770001
• 负责人: 彦坂 暁
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770001/
• 关键词: MITE; Xenopus; T2-family; Transposon; Transposase; Terminal Inverted Repeat (TIR); T2 family

T2-MITE転移因子の転移に関係することが予想されるpiggyBac転移酵素遺伝子をアフリカツメガエル(Xenopus laevis)から2種類単離し、mRNAをin vitroで合成した。T2-MITEの1種であるXmixを挿入したプラスミドDNAを、この合成mRNAとともにアフリカツメガエル卵母細胞に顕微注入した。一晩培養したのち、DNAを抽出し、ベクターからのT2-MITEの切り出しが起きているかをPCR法により調べたが、切り出しは確認されなかった。そこで、(1)転移酵素が変異の蓄積によって不活性化している可能性があるので、近縁種から新たなpiggyBac転移酵素遺伝子を単離し、それらとの比較解析によってその可能性を検討する、(2)piggyBac転移酵素自身のTerminal Inverted Repeat (TIR)を単離し、これを用いて再度活性を調べる、(3)T2-MITEの転移に関連する他の転移酵素がゲノム中に存在する可能性をデータベース解析によって検討する、という3つの方向で研究を進めた。(1)については、X.tropicalisから新しいタィプの2種類のpiggyBac転移酵素遺伝子をPCRにより単離し、既知の転移酵素遺伝子との比較解析を行なった。(2)については、X.tropicalisゲノムデータベースの解析からTIRのコンセンサス配列を見いだし、これをプライマーに用いて、X.laevisとX.tropicalisからPCRによってTIRを単離した。(3)については、MITEのTIRの間に転移酵素が採まれた構造をもつ配列をデータベースから網羅的に探索するプログラムを作成し、X.tropicalisとゼブラフイッシュからT2-MITEのTIRの間にある転移酵素候補配列を見いだし、これらについてより詳しい解析を行なった。

从爪蟾分离出两种类型的PIGGYBAC转移酶基因，预计将与T2-mite转座因子的转移有关，并在体外合成mRNA。将含有Xmix的质粒DNA（其中一种T2-硅）与该合成mRNA一起被微注射到爪蟾卵母细胞中。过夜培养后，提取DNA并切除载体，以确定是否通过PCR从载体中切除T2-Mite，但没有切除切除。 Therefore, we conducted research in three directions: (1) Since it is possible that the transferase is inactivated by the accumulation of mutations, we isolated new piggyBac transferase genes from closely related species and examined their potential by comparative analysis with them, (2) isolated the piggyBac transferase itself terminal inverted repeat (TIR) ​​and used this to investigate the activity again, and (3) examined the possibility that other transferases related to T2-MITE通过数据库分析，基因组中存在转移。关于（1），通过PCR从X.Tropicalis分离出两个新的类型piggybac转移酶基因，并与已知转移酶基因进行了比较。关于（2），从X.tropicalis基因组数据库的分析中发现了TIR的共有序列，并将其用作引物，通过X.laevis和X.tropicalis的PCR分离TIR。关于（3），我们创建了一个程序，该程序可以从数据库中全面搜索与螨虫TIR期间获得转移酶的结构的序列，并找到了X.tropicalis和Zebra Fish之间的候选序列以及T2-Mite的T2-Mite TIR，并在这些方面对这些进行了更详细的分析。