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栄養飢餓状態における植物培養細胞の液胞内オルガネラ分解機構の解明

阐明营养饥饿条件下培养植物细胞液泡内细胞器降解的机制

基本信息

批准号：
15770044
负责人：
豊岡公徳
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

タバコ培養細胞BY-2株にチトクロムb5とRFP (Red fluorescent protein)の融合タンパク質を発現させた場合、細胞増殖期にRFPは凝集パターンを呈し、定常状態期に移行すると液胞内にRFPの蛍光が検出された。そこで我々は、RFPの蛍光を指標にタンパク質凝集体の液胞移行および分解機構について解析を行った。RFP凝集体の液胞移行を誘導する条件を検討した結果、RFPの蛍光は栄養飢餓条件で液胞に移行することがわかった。栄養飢餓条件下でプロテアーゼ阻害剤を加え培養した場合、RFP凝集体は液胞移行せずにオートリソソーム(自食作用胞)様の構造体内に観察されることから、RFP凝集体の液胞移行にはオートファジー機構の関与が示唆された。そこで、オートファジーに中心的な働きを担っているAtg8のBY-2ホモログNtAtg8とYFP (Yellow fluorescent protein)の融合タンパク質を発現させて動的解析を行った。その結果、栄養飢餓条件下に移行すると、リング状のオートファゴソームが誘導されることがわかった。そして、オートファゴソームは中央液胞へ直接、または、小さい液胞内に取り込まれてから中央液胞へ移行することが確認された。その上、RFP凝集体は他のオルガネラに比べ、優先的にオートファゴソームにより取り込まれることがわかった。以上の結果から、RFP凝集体は栄養飢餓により誘導されたオートファゴソームにより取り込まれ、液胞へ移行することが推定された。これらの成果は、国内外の学会およびシンポジウムで発表し、細胞生物学の国際雑誌へ論文を投稿中である。

The cells of BY-2 strain were cultured in vitro. The fusion cells were b5 RFP (Red fluorescent protein). The conjunctivities were observed in the fusion cells, the RFP agglutination in the cell stage and the transition phase in the stationary phase. The intracellular RFP light was detected in the cells. RFP photoluminescence refers to the transfer of liquid cells from the condensed collective to the decomposition mechanism of the condensate. The results of RFP condensate cell migration assay and RFP photoluminescence assay showed that the condition of liquid cell migration was significantly different. Under the condition of high pressure, the liquid cells of the RFP condensate were transferred into the body, and the transfer of the liquid cells of the RFP coagulum was detected in vivo. The system in the center is responsible for the resolution of the data in Atg8 by-2 NtAtg8 YFP (Yellow fluorescent protein). The results show that under the condition of bad weather, the data will be transferred to other places, and the data will be changed. The central liquid cell is located directly, directly and in the small liquid cell. the central liquid cell is transferred to the central liquid cell. The RFP coagulates in the first place, the first one, the first one, the other, the first, the first, the first. The results of the above results show that the RFP agglutination group is responsible for the determination of the concentration of the liquid cell, the migration of the liquid cell and the presumption of the cell migration. The results are listed in the articles submitted by the International Journal of Cell Biology, both at home and abroad.