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担子菌類由来のセルロース分解酵素に対する部位特異的変異の導入と触媒機構の解析

担子菌纤维素分解酶定点突变的引入及其催化机制分析

基本信息

批准号：
15780206
负责人：
五十嵐圭日子
金额：
$ 2.43万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度メタノール資化性酵母による大量発現の構築に成功した白色木材腐朽担子菌Phanerochaete chrysosporium由来のβ-グルコシダーゼに関して反応速度論的解析を行い、加水分解と同時に糖転移反応が起こっていることを明らかにし、これまで基質阻害と考えられてきた現象が糖転移反応によるものであることを定量的に証明した。この結果はCarbohydrate Research 339号2851-2857頁に掲載された。さらに昨年度部位特異的変異の導入に成功したP.chrysosporium由来のセロビオース脱水素酵素は、昨年度作成した166番のフェニルアラニンをチロシンに置換した酵素(F166Y)に関して、定常状態における反応を調べるとともに、ストップトフロー分光光度計を用いて前定常状態における酸化還元反応を詳細に調べ、本酵素が電子伝達鎖反応によって酸化還元反応を行っていることを明らかにした。この結果は現在FEBS Journalに投稿中である。また、上述の部位特異的変異を導入した酵素に加えて、90番のチロシンをフェニルアラニンに置換した酵素(Y90F)、および90番のチロシンと166番のフェニルアラニン双方に変異を導入した酵素(Y90F/F166Y)を作成し、それらにおける電子伝達速度を詳細に調べた。その結果90番のチロシンが電子伝達に重要な役割を担っていることを明らかにし、その結果を第55回日本木材学会大会において発表した。

A large number of successful construction of white wood-decaying basidiomycete Phanerochaete chrysosporum was carried out in the past year. The analysis of the rate theory of hydrolysis and simultaneous sugar migration was carried out. The quantitative proof of the phenomenon of sugar migration was carried out. The results are published in Carbohydrate Research 339, pp. 2851-2857. In the past year, site-specific changes in the introduction of P. chrysosporium origin of the enzyme, yesterday's production of 166 parts of the enzyme, the replacement of the enzyme (F166Y), the steady state of the reaction, the use of the steady state of the reaction, the detailed adjustment of the reaction, This enzyme is responsible for the production of the enzyme enzyme. The results are now published in FEBS Journal. In addition, the site-specific enzyme introduced into the enzyme (Y 90F), the 90-point conversion enzyme introduced into the enzyme (Y 90F/F 166Y), and the 90-point conversion enzyme introduced into the enzyme. The 90th Annual Meeting of the Japan Timber Society was held at the end of this year.

项目成果

期刊论文数量（8）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Igarashi.K., Tani, T., Kawai, R., Samejima, M.: "Family 3 β-glucosidase from cellulose-degrading culture of the white-rot fungus Phanerochaete chrysosporium is a glucan 1,3-β-glucosidase"Journal of Bioscience and Bioengineering. 95. 572-576 (2003)

Igarashi.K.、Tani, T.、Kawai, R.、Samejima, M.：“来自白腐真菌 Phanerochaete chrysosporium 纤维素降解培养物的家族 3 β-葡萄糖苷酶是一种葡聚糖 1,3-β-葡萄糖苷酶”生物科学与生物工程杂志。95. 572-576 (2003)