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インフルエンザウイルスRNA合成反応を制御する宿主因子RAF-2p48の機能解析

控制流感病毒RNA合成反应的宿主因子RAF-2p48的功能分析

基本信息

批准号：
15790241
负责人：
百瀬文隆
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

インフルエンザウイルスゲノムからのRNA合成を促進する宿主因子画分RAF(RNA Polymerase Activating Factor)-2には、ウイルス核タンパク質NP(Nucleocapsid Protein)に対し酸性分子シャペロンとして機能するp48と、RNA認識・結合に関わると予想されるp36が存在する。昨年度の成果より組換え体p48を単独で発現・精製すると多量体化する事が判明したが、RAF-2画分においてp48は多量体化しておらずp36とのヘテロ2量体として存在する。実際、p36上の特定領域にp48が結合する事を証明し、欠損変異体を用いた試験管内および細胞内での解析によって20アミノ酸程度の領域まで結合部位を狭めることに成功した。また、p48はアミノ酸配列上RNA巻き戻し酵素として機能すると推定されているが、どのような標的2本鎖RNAをもちいてもp48単独では有意な巻き戻し滑性を見出すことができなかった。p36の特性を考え合わせ、p48が本来の活性を示すためにはp36のようなRNA結合補助因子を必要とする可能性が考えられる。p36がモデルウイルスゲノムの特定領域に対して優先的に結合する事が明らかと成ったことから、感染細胞内においてウイルスゲノムRNA認識に関与する可能性が示唆された。また、p36がNPとも相互作用しうることが判明し、この相互作用にp36のカルボキシル末端ドメインが関与する事が判明した。このドメインはp48結合部位とは異なることから、p48・p36・NP・ウイルスRNAの4者複合体と成り得ることが判明した。さらに、p36は試験管内においてNP-モデルウイルスRNA複合体形成を促進する活性を持つことが見出された。これらの成果より、p36はp48-NP複合体をウイルスRNA上へと導く役割を担っていると考えられる。

The host factors that promote RNA synthesis include RAF(RNA Polymerase Activating Factor)-2, RAF(Nucleocapsid Protein), p48 (p36), and RNA recognition and binding. Last year's results showed that the RAF-2 system was composed of p48 and p36, and that the RAF-2 system was composed of p48 and p36. In fact, p48 on the p36 specific domain to prove the matter, lack of foreign language in the test tube and intracellular analysis, 20 lack of acid level of the domain to narrow the site of the test success The p48 gene was found to be the most important gene in the p48 gene. The characteristics of p36 and p48 were studied. p36 shows the possibility of RNA recognition in specific areas of infection and in priority areas. The interaction between p36 and NP was identified. The p48 binding site is different from the p48 binding site. The p48 binding site is different from the p36 binding site. The p48 binding site is different from the p36 binding site. In addition, p36 can be detected in the presence of NP-RNA complexes. The p36 and p48-NP complexes were found to be involved in RNA transduction.