口腔腫瘍におけるパールカン遺伝子スプライシング様式の意義

基底膜蛋白聚糖基因剪接模式在口腔肿瘤中的意义

• 批准号: 15791039
• 负责人: 大城 和文
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15791039/
• 关键词: パールカン; ヘパラン硫酸プロテオグリカン; 選択的スプライシング; 口腔腫瘍; ペプチド抗体; 免疫染色; 毛細血管; in-situハイブリダイゼーション

本研究課題は、申請者が発見した二つのパールカン・スプライシング亜型の細胞特異的、細胞増殖過程特異的に発現する可能性を探り、生体内での生理学的ならびに病理学的意義の解明につなげるものである。パールカンドメインIとIIの間に新規エクソンが挿入される第一スプライシング亜型では、そのエクソン部分の17アミノ酸の配列においてヒトとマウスで二つのアミノ酸が異なっている、今回、新たにヒトとマウスの新規エクソン部分のポリペプチド鎖全長を合成し、それぞれ二羽のウサギに免疫しポリクローナル抗体を作製した。これらの抗体をもちいて、スプライシング亜型の組織および細胞内局在様式を免疫組織化学的に解析するとともに、免疫沈降法とウェスタンブロット法を組み合わせ生化学的にスプライシング亜型の発現を解析した。以前に作製した抗体で得られた染色結果と同様に主に基底膜に認められる野生型とは異なり、第一亜型では毛細血管に特異的な染色パタンが確認された。また、軟骨組織では軟骨小腔に特異的な染色が認められた。さらに、これらの抗体をもちいたマウス各臓器における第一亜型のタンパク質発現の解析では、400kDa以上の分子量をもち野生型と同じ挙動を示すバンドが確認され、その発現量がRT-PCRによるmRNA発現の解析結果とよく一致することが示された。また、軟骨組織をもちいてスプライシング亜型のin-situハイブリダイゼーションを行った。結果は免疫組織化学的解析の結果と一致し、スプライシング亜型のmRNAは軟骨細胞に特異的に発現することが示された。

This research topic is based on the applicant's specificity of the cell proliferation process. Exploration of the possibility of the emergence of different diseases, explanation of the significance of pathology in the physiology of the body, and explanation of the significance of pathology.パールカンドメインIとIIの间に新码エクソンがinsertされる一スプライシングThe type of では, the そのエクソン part of the 17アミノ acid の arrangement においてヒトとマウスで二つのアミノ sour acid different なっている, this chapter, new たにヒトとマウスの新码エクソン partially のポリペプチThe full length of the lock is synthesized, and the two feathers are made of immune antibodies.これらのantibody をもちいて、スプライシング亜 type の tissue および intracellular localization 様 type を に analysis of immunohistochemistry するとともに, immunosedimentation method, とウェスタンブロットmethod, group み合わせbiochemistry, にスプライシング亜-type の発成をanalytical した. Previously, the antibody was produced and the staining results were obtained and the basement membrane was identified using the same method. The first type of とは different なり, the first 亜 type では capillary に specific な dyeing パタンがconfirmation された.また、Cartilage tissue ではCartilage cavities にSpecific な stainingがRecognize められた.さらに、これらのantibodies をもちいたマウスeach type Analysis of the quality of the material and the molecular weight of 400kDa and above The biotype is the same as the confirmed one, and the analysis result of RT-PCR and mRNA expression is the same as the confirmed one.また, cartilage tissue をもちいてスプライシング亜のin-situハイブリダイゼーションを行った. The results of the analysis of immunohistochemistry were consistent, and the specificity of the type of mRNA in chondrocytes was shown to be the same.