細胞膜型ヘパラン硫酸プロテオグリカン群の受容体活性、特異性の解析

细胞膜型硫酸乙酰肝素蛋白多糖受体活性及特异性分析

• 批准号: 11159222
• 负责人: 小栗 佳代子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: National Research Institute for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11159222/
• 关键词: シンデカンファミリー; インテグリン; フィブロネクチン受容体; ストレスファイバー; 細胞接着; 細胞骨格形成; シグナル伝達; ヘパラン硫酸プロテオグリカン

1.シンデカン分子間の機能特異性の解析フィブロネクチンの細胞結合部位とヘパリン結合部位の組換えペプチドを接着基質とした時、P29細胞にストレスファイバー形成が誘導されることを明らかにしてきた。後者を抗シンデカン1〜4抗体に置き換えて各シンデカンの特異性を検討した結果、このシグナル伝達の仲介に、(1)シンデカン1、3は関与しない、(2)シンデカン2が必須である、(3)シンデカン4はシンデカン2が十分量発現されている場合あるいはシンデカン2のリガンド結合シグナルが先行する場合にのみ関与する、ことが明かとなった。これにより、同一細胞が同時に細胞表層に発現しているシンデカンファミリーメンバー間に機能特異性があることが証明された。2.遺伝子改変によるシンデカン2の機能解析(1)シンデカン2のセリン残基のリン酸化の解析これまでにシンデカン2タンパク芯細胞質部位のセリン残基がリン酸化されることを明らかにしてきた。そこで、いずれのセリン残基がリン酸化されるのか、また、基質接着依存的にリン酸化されるのかあるいは脱リン酸化されるのかを明らかにするため、本年度申請計画に従い、細胞質部位に3箇所存在するセリン残基を1、2、3箇所それぞれアラニン残基に変えたシンデカン2改変cDNAを7種作成した。現在、H11細胞に各cDNAを導入して株化する作業を行なっている。(2)シンデカン2細胞外部位へパラン硫酸側鎖の解析これまでにマウスシンデカン2が3本のヘパラン硫酸と1本のコンドロイチン硫酸とを有し、そのうちヘパラン硫酸側鎖を介してフィブロネクチンと結合することを明らかにしてきた。それぞれの糖鎖の位置、機能を明らかにするために、糖鎖が伸長する4つのSG配列のセリン残基をアラニン残基に変えたシンデカン2改変cDNAを17種作成した。現在、H11細胞に各cDNAを導入して株化する作業を行なっている。

1. Analysis of the specificity of functions between the molecules of シンデカン, フィブロネクチンのcell-binding site, and とヘパリンbinding site replacement. When the stem is connected to the matrix, the P29 cell stem is formed into a stem-induced stem cell. The latter is the result of the specificity of the anti-Syncon1 to 4 antibodies, and the results of each of the specific antibodiesシグナル伝达の中经に, (1) シンデカン1, 3は关与しない, (2) シンデカン2が必である、(3)シンデカン4はシンデカン2が十级発出されているoccasionあるいはシンデカン2のリガンド Combined with シグナルが前行するoccasion にのみseki and する, ことが明かとなった.これにより、The same cell がsimultaneously にThe cell surface に発appears しているシンデカFunctional specificity of ンファミリーメンバーに があることがprovenされた. 2.Functional analysis of the modified によるシンデカン2の(1) Analysis of the acidification of the シンデカン2のセリン residue The れまでにシンデカン2タンパク core cytoplasmic site のセリン residue がリン acidification されることを明らかにしてきた.そこで, いずれのセリン residue がリン acidification されるのか, また, matrix-dependentにリン acidification されるのかあるいは de-リン acidification されるのかを明らかにするため, this The annual application plan is the residues 1, 2, and 3 of the residues 1, 2, and 3 existing in the cytoplasmic site Therefore, 7 kinds of cDNA were created using the それぞれアラニン residue に変えたシンデカン2. Currently, each cDNA of H11 cells has been introduced into the H11 cells and is now in production. (2) シンデカン2 Extracellular site へパラン sulfate side lock analysis これまでにマウスシンデカン2 3 本のヘパラン sulfate と1 のコンドロイチン sulfuric acid とを有し、そのうちヘパラン sulfuric acid side lock をしてフィブロネクチンと合することを明らかにしてきた.それぞれのsugar lock no position, function を明らかにするために, sugar lock がstretch する4つのSG arrangementのセリンをアラニンに変えたシンデカン2 modified 17 kinds of cDNA were made. Currently, each cDNA of H11 cells has been introduced into the H11 cells and is now in production.

项目成果

Kusano, Y., et al: "Participation of syndecan 2 in the induction of stress fiber formation in cooperation with integrin α5β1 : Structural characteristics of heparan sulfate chains with avidity to COOH-terminal hepari-binding domain of fibronectin"Experime

Kusano, Y. 等人：“多聚糖 2 与整合素 α5β1 协同诱导应力纤维形成：硫酸乙酰肝素链的结构特征，对纤连蛋白 COOH 末端肝素结合域具有亲和力”实验

Habuchi, H., et al.: "The occurrence of three isoformas of heparan sulfase 6-O-sulfotransferase having different specificities for hexuronic acid-sulfoglucosamine"The Journal of Biological Chemistry. 275. 2859-2868 (2000)

Habuchi, H.等人：“对己糖醛酸-磺基葡萄糖胺具有不同特异性的乙酰肝素硫酸酯酶 6-O-磺基转移酶的三种亚型的出现”《生物化学杂志》。

Liu, J., et al.: "Heparan sulfase D-glucosaminyl 3-O-sulfotransferase-3A sulfates Nunsubstituted glucosamine residues"The journal of Biological Chemistry. 274. 38155-38162 (1999)

Liu, J., et al.：“乙酰肝素硫酸酯酶 D-葡萄糖胺基 3-O-磺基转移酶-3A 硫酸化未取代的葡萄糖胺残基”生物化学杂志。

Zhang, L., et al.: "Anticoagulant heparan sulfate precursor strucutes in F9 embryonal carcinoma cells"The Journal of Biological Chemistry. 274. 2681-5691 (1999)

张，L.，等人：“F9胚胎癌细胞中的抗凝血硫酸乙酰肝素前体结构”生物化学杂志。