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歯髄・歯根膜再生療法を確立するためのin vitroでのエナメル芽細胞の分化誘導

成釉细胞体外分化诱导建立牙髓及牙周膜再生疗法

基本信息

批准号：
15791107
负责人：
諸冨孝彦
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyushu Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、ラット切歯を形成する上皮細胞群の、幹細胞を含むことが報告されているapical budから摘出した細胞を、単培養および歯乳頭細胞との供培養を行い、未分化エナメル上皮細胞のエナメル芽細胞への分化に歯の間葉細胞がどのような役割を果たすのかを検索し、報告した(Archs Oral Biol. in press : accepted in 2004)。この研究では、apical budの細胞群は単培養では増加が認められず、またエナメル芽細胞の分化マーカーとして用いたameloblastinの発現も、培養期間が10日に達しても認められなかった。一方、歯乳頭細胞との供培養では、細胞数は減少し続けるものの、培養2日目には上皮細胞の半数が内エナメル上皮細胞の分化マーカーであるp75NGFRを発現し始め、培養4日目には上皮細胞中にameloblastinの発現を認め、さらに培養10日目ではほとんどすべての上皮細胞がameloblastinを発現した。他方、内エナメル上皮細胞群を単培養すると細胞は増殖し続け、また培養10日目までにその一部がameloblastinを発現した。歯乳頭細胞との供培養では、細胞数は2日目までは増加するものの、その後は減少した。しかしながらameloblastinを分泌する上皮細胞は増加し、ほとんどすべての上皮細胞がameloblastinを発現するようになった。以上より(1)歯乳頭細胞は未分化エナメル上皮細胞を、内エナメル上皮細胞への分化経路に誘導すること、(2)また、歯乳頭細胞は未分化エナメル上皮細胞の増殖にも必要とされること、(3)内エナメル上皮細胞はすでにそのエナメル芽細胞への分化運命が決定なされており、transit amplifying cellとしての性質を持つこと、(4)歯乳頭細胞は内エナメル上皮細胞の増殖サイクルを止め、エナメル芽細胞への分化を加速させることが示唆された。さらに、昨年度確立し、報告したラット切歯由来組織間細胞様未分化エナメル上皮細胞株HAT-7(J Dent Res. 83:129-133,2004)とラット切歯由来歯髄細胞株RPC-C2A(Kasugai S. et al. Archs Oral Biol. 33,887-891,1988)との供培養を行い、cell lineの細胞でも同様の結果が認められた(投稿準備中)。これらから、実際にin vitroでのエナメル芽細胞誘導の可能性が示され、歯髄・歯根膜再生療法を可能とするエナメル基質タンパクの生成・回収実現への基礎的な知見を得ることができた。

This year, we have reported on the development of epithelial cell populations and stem cells, including apical bud, isolated cells, undifferentiated epithelial cells, embryonic bud, differentiated mesenchymal cells, and stem cells (Arches Oral Biol. in press : accepted in 2004). In this study, apical bud cell populations were cultured for 10 days to increase the differentiation of apical bud cells. The number of cells in one group of papilla cells decreased after culture. Half of the epithelial cells differentiated into epithelial cells after 2 days of culture. p75NGFR was detected in epithelial cells after 4 days of culture. ameloblastin was detected in epithelial cells after 10 days of culture. Other, internal epithelial cell populations were cultured for 10 days and some ameloblastin was found The number of papillary cells in culture increased after 2 days and decreased after 2 days. Epithelial cells secrete ameloblastin, and epithelial cells secrete ameloblastin. (1) Induction of differentiation pathway of undifferentiated epithelial cells in dental papilla cells;(2) Necessary for proliferation of undifferentiated epithelial cells in dental papilla cells;(3) Determination of differentiation fate of undifferentiated epithelial cells in dental papilla cells;(4) The proliferation and differentiation of dental papilla cells were accelerated. Today, it was established and reported yesterday that the HAT-7 epithelial cell line (J Dent Res. 83:129- 133, 2004) and the RPC-C2A cell line (Kasugai S. et al. Arches Oral Biol. 33, 887 - 891, 1988). The results of cell culture and cell line identification are also available (submission preparation). The possibility of root bud induction in vitro is demonstrated by the knowledge that root membrane regeneration therapy is possible and that root matrix regeneration is possible.