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一酸化窒素により生じるDNA損傷の遺伝的影響と修復機構の解明

阐明一氧化氮引起的DNA损伤的遗传效应和修复机制

基本信息

批准号：
04J05228
负责人：
中野敏彰
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J05228/
关键词：
NO cross-link DNA修復突然変異 Oxanine

项目摘要

一酸化窒素はDNA塩基の脱アミノ化を誘発し、グアニンからはキサンチンとオキザニン(Oxa)が生成する。これまでの研究で、Oxaは生体内物質とクロスリンクし、二次的損傷に変化するとを明らかにした。本研究では、これらの遺伝的影響と修復機構を検討した。まず遺伝的影響を検討するため、Oxaおよびスペルミン(Sp)とクロスリンクしたOxa(Oxa-Sp)を含むオリゴヌクレオチドを鋳型としてin vitroでDNA複製を行い複製が阻害される部位、複製阻害の強さ、損傷部位に取り込まれるヌクレオチドを解析した。OxaおよびOXA-Spは、それぞれ中程度および強い複製阻害効果を示した。Oxaには、dCMPおよびdTMPが1:0.72の効率で取り込まれ、Oxa-SpにはdAMPが低い効率で取り込まれた。よって、Oxaは中程度の致死効果を示すが、損傷乗り越え合成(TLS)が起こるとG:C-A:T transitionを誘発すること、一方Oxa-Spは強い致死効果を示すが、TLSが起こるとG:C-T:A transversionを誘発することが示された。次に修復機構を検討するため、塩基除去修復酵素を用いてOxaに対する除去活性を検討したが、その結果これらのOxaに対する除去活性は極めて弱かった。一方、Oxa-Spに対する活性は用いたすべての塩基除去修復酵素で認められなかった。Oxa-Spはかさ高い損傷であることから、ヌクレオチド除去修復(NER)機構により修復される可能性が高い。そこで、UvrABCヌクレアーゼおよび細胞粗抽出物を用いて、Oxa-Spに対するNER切断活性を検討した。Oxaを含む基質は切断されなかったが、Oxa-Sp含む基質は効率良く切断され、Oxa-SpがNER機構により修復されることが明らかとなった。

An enzyme that induces DNA cleavage and cleavage is called Oxa (Oxa). This study shows that Oxa is a substance in vivo and a secondary damage agent. This study discusses the influence of the genetic material on the restoration mechanism. The effect of DNA replication on the replication of DNA is discussed. Oxa(Oxa-Sp) and Oxa(Oxa-Sp) are included in the analysis of replication inhibition sites, replication inhibition strengths, and damage sites. Oxa and OXA-Sp are highly resistant to replication. Oxa, dCMP and dTMP have an efficiency of 1:0.72, Oxa-Sp has a low efficiency. Oxa, Ox The secondary repair mechanism is to remove the enzyme activity by Oxa. One side, Oxa-Sp, activity is used to remove the base repair enzyme. Oxa-Sp has a high probability of damage, removal and repair (NER) mechanisms. UvrABC, UvrABC Oxa-Sp is a good substrate for cutting, Oxa-Sp is a good substrate for repairing.