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一酸化窒素により生じるDNA損傷の遺伝的影響と修復機構の解明

阐明一氧化氮引起的DNA损伤的遗传效应和修复机制

基本信息

批准号：
04J05228
负责人：
中野敏彰
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J05228/
关键词：
NO cross-link DNA修復突然変異 Oxanine

项目摘要

一酸化窒素はDNA塩基の脱アミノ化を誘発し、グアニンからはキサンチンとオキザニン(Oxa)が生成する。これまでの研究で、Oxaは生体内物質とクロスリンクし、二次的損傷に変化するとを明らかにした。本研究では、これらの遺伝的影響と修復機構を検討した。まず遺伝的影響を検討するため、Oxaおよびスペルミン(Sp)とクロスリンクしたOxa(Oxa-Sp)を含むオリゴヌクレオチドを鋳型としてin vitroでDNA複製を行い複製が阻害される部位、複製阻害の強さ、損傷部位に取り込まれるヌクレオチドを解析した。OxaおよびOXA-Spは、それぞれ中程度および強い複製阻害効果を示した。Oxaには、dCMPおよびdTMPが1:0.72の効率で取り込まれ、Oxa-SpにはdAMPが低い効率で取り込まれた。よって、Oxaは中程度の致死効果を示すが、損傷乗り越え合成(TLS)が起こるとG:C-A:T transitionを誘発すること、一方Oxa-Spは強い致死効果を示すが、TLSが起こるとG:C-T:A transversionを誘発することが示された。次に修復機構を検討するため、塩基除去修復酵素を用いてOxaに対する除去活性を検討したが、その結果これらのOxaに対する除去活性は極めて弱かった。一方、Oxa-Spに対する活性は用いたすべての塩基除去修復酵素で認められなかった。Oxa-Spはかさ高い損傷であることから、ヌクレオチド除去修復(NER)機構により修復される可能性が高い。そこで、UvrABCヌクレアーゼおよび細胞粗抽出物を用いて、Oxa-Spに対するNER切断活性を検討した。Oxaを含む基質は切断されなかったが、Oxa-Sp含む基質は効率良く切断され、Oxa-SpがNER機構により修復されることが明らかとなった。

One acidified asphyxiant (DNA) was used to remove the acid asphyxiating hormone (Oxa), so as to induce the formation of asphyxiate. The research, the Oxa, and the secondary biochemistry of the substances in vivo have been studied. In this study, the film repair institution of this study is responsible for the training of the students. The shadow of the computer (Sp), the Oxa (Oxa-Sp), the in vitro copy, the DNA copy, the location, the strength, the strength, the location, the location, the location, Oxa has a strong copy of the OXA-Sp, and the results show that there is a moderate degree of infection. The rates of Oxa, dCMP, dTMP, and dAMP are 0.72%, 0.72% and 0.72%, respectively, and the rate of low rate is 0.72%. The moderate lethal degree of Oxa is shown, the synthesis (TLS) of moderate lethal, the synthesis of G:C-A:T transition, the strong lethal of one side of Oxa-Sp, and the indication of TLS of moderate lethal, moderate and moderate lethal are shown. In the secondary repair machine, the Oxa enzyme was used to remove the active enzyme, and the active enzyme was used to remove the active enzyme. The results showed that the active enzyme was removed by the Oxa enzyme. On the one hand, the Oxa-Sp enzyme activity was used to remove the enzyme from the enzyme. The Oxa-Sp system is very important, and it is highly likely that the repair (NER) mechanism may be used to repair the equipment. The crude extract of the cell was isolated by UvrABC, Oxa-Sp, and NER cutting activity. Oxa contains basic equipment to cut off equipment, Oxa-Sp contains basic equipment to improve the rate of production, and Oxa-Sp NER organization to modify the equipment to improve accuracy.